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体内表达结核分枝杆菌3株小鼠感染后的抗原识别及卡介苗接种

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发表时间:2021-06-09 14:37作者:武汉新启迪Xinqidibio

摘要

新型结核病(TB)疫苗最好是(1)提高先前卡介苗疫苗诱导的宿主免疫应答,(Ii)针对结核分枝杆菌(MTB)在整个MTB感染周期。人MTB抗原发现筛选鉴定出编码的抗原MTB-小鼠体内感染高表达基因(IV-TB抗原)。为了将这些发现转化为动物模型,我们确定了哪种ive-tb抗原被T细胞识别。MTB三种不同的小鼠接种卡介苗。十一MTB-抗原在耐结核和易感的小鼠身上被识别。确认了以前的人类数据MTB-抗原诱导的细胞因子,而非干扰素-γ。易感C3HeB/FEJ小鼠肺细胞产生的肿瘤坏死因子-α较少,符合结核病易感表型。此外,卡介苗还能诱导C3HeB/FEJ小鼠对多种抗原产生反应,具有促进作用。因此,对有前途的人的认可MTB-在人类中发现的抗原可以在多种不同结核病易感性的小鼠结核病感染模型中得到验证。这提供了翻译工具来评估艾维-结核抗原作为诊断和疫苗抗原。

导言

结核病(TB)仍然是世界上由单一细菌病原体引起的最广泛和最致命的传染病。1。其病原体的传播,结核分枝杆菌 (MTB儿童接种卡介苗(Bcg),这是目前唯一获得许可的结核病疫苗。2。因此,在过去的几十年里,无数的努力都试图开发出更好的结核病疫苗。3。最近的两项独立的临床疗效试验显示,卡介苗再接种导致持续免疫减少。MTB感染,以及多次注射一种辅助性结核亚单位疫苗m72/as01E,能够防止结核病的发展。MTB感染个体4,5。尽管M72/AS01E的有效性仍需在更大的群体和不同地理区域得到证实6,此发现强调了使用选定的MTB作为卡介苗疫苗的抗原2。然而,结核病防护的免疫相关性尚不清楚,这对这种保护性的识别提出了挑战。MTB疫苗设计用抗原7.

近年来,我们已鉴定出MTB抗原,命名为ive-tb抗原,编码MTB气溶胶后肺结核易感小鼠(C3HeB/FEJ)和耐结核小鼠(C57BL/6J)肺组织中高表达的基因MTB(厄德曼)挑战8,9。因为这些MTB基因在体内高表达,编码的IV-TB蛋白代表了一组有趣的候选抗原,原因有几个。首先,它们被保存在至少219个MTB临床分离物和其他致病性分枝杆菌,因此有可能引起对多种人类毒力的免疫反应。MTB菌株。其次,它们与卡介苗有很高的同源性,因此很有可能在增强疫苗策略中实现。此外,它们还包含多个预测的HLA-Ia和HLA-II结合基序,覆盖了85%的人口。最后,最重要的是,许多ive-tb抗原已被免疫细胞识别。MTB感染(LTBI)患者和结核病患者9,10。有趣的是,这些T细胞能够产生多种细胞因子,此外,甚至在没有干扰素-γ的情况下。9,10.

因为没有人类MTB挑战模型和有效的保护相关关系,有希望的候选疫苗通常在小鼠身上进行测试,然后在更大的动物模型中进行评估,并最终进行临床试验。11。许多MTB抗原,例如结核病疫苗管道中最先进的候选抗原。12,13,14,15,16,以前曾在C57BL/6和BALB/c中进行过筛查。17。这两种菌株(特别是C57BL/6)对结核都比较耐药,没有显示人类结核病的全部病理表现,例如中央坏死病变的发展。18。相比之下,较少使用的C3HeB/FEJ株(也称为Kramnik模型)出现坏死性病变和肺空化,类似于在人类结核病中发现的。19.

为了将我们以前从人类队列中的研究成果转化为高控制性的体内结核病模型,可以探索候选疫苗的保护效果,我们的目标是:(I)评估不同菌株ive-tb抗原的前景。MTB感染小鼠,包括结核耐药小鼠(C57BL/6,BALB/c),以及结核病易感株(C3HeB/FEJ),认为在不同遗传背景的小鼠中识别抗原,以及广泛不同的结核病易感性,将更好地反映人类群体中发现的结核异质性;(Ii)研究IVE-TB抗原是否在小鼠和不同器官(即脾、肺和纵隔引流淋巴结)中诱导IFN-γ以及非IFN-γ细胞因子反应(TNF-α和IL-17),以便鉴定这些抗原,这些抗原虽然在所有小鼠品系中都有识别,但在耐药和易感小鼠中也会诱导不同的细胞因子谱。当断言抗原在敏感菌株中被识别时,通过使用适当的佐剂接种疫苗,细胞因子和细胞反应可以被重新定向到保护性反应(例如,在耐药菌株中发现的反应)。(Iii)确定在MTB在用卡介苗接种疫苗后,感染也会被确认,其基本原理是区分高度特异性。MTB在有标准新生儿卡介苗接种方案的地区,可作为结核病诊断有用的候选抗原,MTB/BCG共享抗原,可用作卡介苗增强疫苗;(Iv)并在两个不同的实验室和实验环境中验证多个实验室的研究结果,以增强对结果的信心,特别是考虑到人类结核病的巨大异质性。后者符合最近的建议,这些建议鼓励研究人员对不同的小鼠品系、感染途径进行临床前发现筛查,MTB菌株和实验室,在进行更昂贵和资源要求更高的动物和人类研究之前17.

我们发现19MTB从不同的小鼠组织中分离出的细胞所能识别的抗原,对产生的细胞因子有广泛的免疫反应,并对三种小鼠的遗传背景进行了研究。值得注意的是,对其中11种抗原的识别在一个独立的环境中得到了证实。因此,我们的多实验室方法被认为是有希望的。MTB作为结核病控制工具潜在应用的抗原靶点。

结果

通过产生不同细胞因子的细胞识别三种不同基因的小鼠多器官中的IgE-TB抗原

有希望的结核候选疫苗抗原首先需要在小动物模型中得到验证,然后才能被选择用于大型动物模型(如非人类灵长类动物)的评估,并最终在人类临床试验中进行测试。11。在这里,我们的目的是验证哪些ive-tb抗原,先前证明是由来自结核病患者和LTBI患者的T细胞识别的。9,10,在小鼠生长过程中得到一致和广泛的认可。MTB感染有着不同的遗传背景,因为人类群体的遗传差异很大。为了包括不同的遗传背景,具有广泛不同的结核病易感表型,我们选择了C57BL/6,BALB/c和C3HeB/FEJ小鼠,并对这些小鼠进行了MTB20,21。每个器官(脾脏、肺和纵隔淋巴结)、应变和时间点(早期(5周)或后期(9-12周))的不同细胞池。MTB同时用单一或融合的ive-tb抗原(n=22)(表1)以及阳性对照(ConA和PWM)。1A,补充数据1)。除了艾维-结核抗原,还有其他几种特定的和分泌的-MTB抗原(n因为以前有几项研究称这些是有希望的(诊断性的)结核生物标记物,或者被认为是结核病疫苗接种的抗原。22,23,24,25(表)1)。刺激3d后,测定细胞上清液中干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-17的浓度。细胞因子水平MTB比较了天真小鼠和小白鼠的抗原。MTB在从未受刺激的阴性对照样本中减去背景浓度后,对每个器官和小鼠品系进行挑战小鼠(补充数据)1).

表1MTB本研究包括抗原。
图1:大多数ive-tb抗原是由下列细胞识别的MTB受感染小鼠不同品系、器官和细胞因子的差异。
figure1

a用1×10刺激C57BL/6(BL6)、BALB/c(BALB)和C3HeB/FEJ(C3H)小鼠4CFUMTB-lux菌株在感染后的早期(5周)或以后(9-12周)死亡。MTB感染。未受感染的天真对照小鼠被并行地杀死和测试。单个或融合刺激肺、纵隔淋巴结或脾脏的集合细胞。MTB抗原或阳性对照刺激ConA和PWM。刺激3d后,测定细胞上清液中干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-17的浓度,并进行背景校正。b特定热图MTB每种细胞因子的抗原反应都显示出来。颜色梯度表示细胞因子浓度,而星号表示天真和MTB被挑战的群体。白*p-数值<0.05,用Kruskal-Wallis检验计算;黑色星号标记在多次测试校正后仍有显着性差异(q-数值<0.1,即按FDR调整p-Mann值-Whitney.test)c根据下列已知类别计算每个PLS-DA模型的可变重要度(Vip)分数的3D图:(I)时间点(即天真的老鼠和在早期或后期被杀死的老鼠)MTB(2)感染小鼠(C57BL/6(BL6)、BALB/c(BALB)和C3HeB/FEJ(C3H)小鼠);(3)器官(即肺、纵隔淋巴结或脾脏);(Iv)细胞因子(IFN-γ、TNF-α和IL-17)。VIP评分>1的抗原被认为对模型有高于平均水平的影响,用实心点表示。细胞因子PLS-DA模型VIP评分>1的抗原用实心红点表示.VIP评分<1的抗原用空点表示,在3D图中省略了它们的名字。

当将细胞因子反应与27分组时,出现了几种趋势。MTB抗原包括在本研究(补充图1)。大多数被选择的人都有较高的肿瘤坏死因子-α反应。MTB抗原,最主要的是在脾脏,在所有三个品系小鼠。其次,从c3heb/fej小鼠身上分析的细胞显示,产生tf-α的能力总体上下降了。MTB抗原,特别是来自骨髓和肺的细胞,即使在有丝分裂原刺激后,其肿瘤坏死因子-α反应也很低或不存在。1B及补充图1)。抗原特异性IFN-γ和IL-17反应在各器官和小鼠株间分布较多,差异很大(图1)。1B)。有趣的是,特别是在BALB/c和C57BL/6小鼠中,IL-17反应主要发生在肺和骨髓LN分离的细胞中,而IL-17反应在脾细胞中几乎不存在(补充图1)。对于脾细胞和髓质LN,细胞因子产生的高峰主要出现在细胞因子产生的早期。MTB感染,而肺细胞,这是在后期观察(补充图1)。IFN-γ反应在C3HeB/FEJ小鼠中倾向于最高,这是最易感染结核病的毒株,这证实了IFN-γ本身并不足以提供保护性免疫。

MTBC57BL/6小鼠髓质LN细胞(18/27抗原已被识别),其次为C3HeB/FEJ(7/27抗原识别)和BALB/c(4/27抗原识别)小鼠。1B).

从这些抗原中,所有小鼠株(Rv 0826)只识别1种,C57BL/6和C3HeB/FEJ(Rv 1886、Rv 0440、Rv 1980、Rv 1791和Rv 1733)识别5种,C57BL/6和BALB/c小鼠(Rv 1131、Rv 1221和Rv 0470)识别3种。在C57BL/6小鼠和其他两种小鼠中,髓质LN细胞产生多种细胞因子。MTB抗原。3种抗原(C57BL/6小鼠:Rv 1886、Rv 1131和Rv 1980)和5种抗原(C57BL/6小鼠:Rv 0287/88、Rv 0470、Rv 1791、ESAT 6/CFP 10和Rv 0440)的不同组合为:IFN-γ、TNF-α和IL-17。Rv 0440在C3HeB/FEJ小鼠、IFN-γ和IL-17两种抗原(C3HeB/FEJ小鼠:Rv 0826和Rv 1980)、TNF-α和IL-17对2种抗原(C57BL/6小鼠:Rv 3616;BALB/c小鼠:Rv 1131)中有相同的细胞因子谱。

抗原特异性脾细胞应答MTB在C57BL/6小鼠(11种抗原识别)和C3HeB/FEJ(2种抗原识别)小鼠中主要检测到抗原。其中,C57BL/6和BALB/c小鼠之间只有一种抗原Rv 1886的识别,而C57BL/6和C3HeB/FEJ之间只有Rv 1791的识别。C57BL/6小鼠脾细胞对5种抗原(Rv 1886、Rv 0287/88、Rv 0470、Rv 1791和Rv 3615)产生多种细胞因子,即IFN-γ和TNF-α。

肺细胞所识别的抗原比从其他组织中分离出来的细胞要少(如图所示)。1C)。其中部分抗原为小鼠肺细胞所识别(Rv 0287/88为所有小鼠株所识别,Rv 1886为C57BL/6和BALB/c,ESAT 6/CFP 10和Rv 1791为C57BL/6和C3HeB/FEJ)。4种抗原(C57BL/6小鼠:Rv 0287/88和Rv 0470;BALB/c小鼠:Rv 1886;C3HeB/FEJ小鼠:Rv 1791),肺细胞分泌了显著水平的IFN-γ和IL-17。在BALB/c小鼠中,只有一种抗原(Rv 0287/88)出现干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-17(IL-17)联合反应。

在进行非常严格的FDR校正后,上面列出的大多数差异不再显着,但重要的是,这还包括对对照组和已知具有高度免疫原性的抗原(如ESAT 6/CFP 10)的反应。1B和2C)。因此,研究结果在FDR校正前后都会显示出来,以避免在发现的早期阶段丢失与生物学相关的候选基因的风险。

图2:ive-tb抗原特异性应答MTBC3HeB/FEJ(C3H)小鼠感染及卡介苗接种
figure2

aC3HeB/FEJ小鼠H37Rv-Mtb菌株(10)5CFU(10只小鼠),卡介苗皮下接种(5只小鼠)或未处理(5只小鼠)。6周后,取脾细胞,每只小鼠刺激6天,每组18只。MTB抗原或阳性对照(ConA、PPD、珠打乱卡介苗(BCG Bub)和MTB或阴性对照(HPV16E6重组蛋白)。每只小鼠体内每种情况下,均从刺激样本中减去未受刺激样本中检测到的干扰素-γ浓度。b免疫小鼠脾细胞抗原刺激后产生的干扰素-γ(左板)和卡介苗免疫前后比较MTB感染小鼠(右面板)。DOTS显示中位IFN-γ的产生.当卡介苗和卡介苗的中位γ产量均超过500 pg/ml时,抗原的(Rv)编码被指示。MTB受感染的老鼠。水平虚线表示以500 pg/ml的水平切断,这是在bcg免疫和阴性对照中发现的干扰素-γ产量中位数的两倍。MTB感染小鼠(右面板)。c干扰素-γ对MTB免疫和BCG免疫的脾细胞抗原MTB被感染的老鼠被展示出来。点表示单个鼠标(10只鼠标在MTB感染组、单纯免疫组和卡介苗免疫组中的5只小鼠和BAR显示了各组干扰素-γ反应的中位数。这个MTB采用kruskal-Wallis试验和ap-值<0.05被认为是显著的。星号标记在多次测试校正后仍显着性的差异(q-数值<0.1,即按FDR调整p-Mann-Whitney检验的数值)。

有趣的是,在耐药小鼠中,有几种抗原(Rv 0470、Rv 0826、Rv 0991、Rv 1131、Rv 1221、Rv 1733、Rv 1846、Rv 1980、Rv 2034、Rv 2873、Rv 3052、Rv 3353和Rv 3616)对肿瘤坏死因子-α有显著的诱导作用,但对IFN-γ反应无明显影响。除Rv 1846外,缺乏明显的干扰素-γ应答似乎是由于供体反应的异质性,而不是完全缺乏这种细胞因子(补充图3)。

为了在随后的独立多元分析方法中验证结果,我们使用PLS-DA模型确定了促使细胞因子反应区分的关键抗原(E/C、Rv 0642、Rv 0287/88、Rv 0991、Rv 1791、Rv 1886、Rv 2029和Rv 3616);(Ii)小鼠品系(E/C、Rv 0287/88、Rv0440、Rv 0470、Rv 0642、Rv 1221、Rv 1791、Rv 1886、Rv 2029、Rv 2873和Rv 3615);(3)器官(E/C、Rv 0287/88、Rv 1131、Rv 1791、Rv1886、Rv2029、Rv2873和Rv 3616);(Iv)细胞因子类型(E/C、Rv 0287/88、Rv 0440、Rv 1131、Rv 1791、Rv 1886、Rv 1980、Rv 2029和Rv 3615)。PLS-DA蛋白簇(补充图2A)与非监督PCA(补充图2B)得到的蛋白质簇非常相似,证实了它们的有效性。(补充数据)1还有无花果。1C)。值得注意的是,这种独立的多变量方法证实了在我们的第一次分析中发现的19种蛋白质中有13种是有趣的目标。

总体而言,选定的27人中有19人MTB抗原(图1.1C(以黑体字表示)从分离到的细胞中产生大量的细胞因子。MTB受感染的老鼠与未感染的动物相比。值得注意的是,尽管正如预期的那样,这些反应有些异质性,但在本研究中分析的13种抗原似乎在不同的小鼠品系、时间点、细胞因子类型和组织之间引发了歧视性的细胞因子反应。但也许最重要的是,研究结果表明,人类T细胞识别图谱可以很好地转化为小鼠模型,这是本研究的主要目的之一。

活卡介苗接种后ive-tb抗原特异性应答

为了使结核病亚单位疫苗有效,最好能提高预先接种疫苗所引起的免疫反应。26。卡介苗,尽管其对成人结核病的保护效力不足,仍然是唯一获得许可的结核病疫苗,并在预防严重儿童结核病方面非常有效。2。评价bcg免疫是否能诱导对ive-tb抗原的免疫反应,并将其与cg诱导的免疫应答进行比较。MTB感染,C3HeB/FEJ小鼠H37Rv-Mtb菌株(10)5Cfu)(10只小鼠),用卡介苗(5只小鼠)皮下接种或未处理(5只小鼠)。2A)。6周后,取脾细胞,刺激6天,每组18只。MTB从我们的第一个筛检中选择抗原(如图所示)。1C)。阳性(ConA,PPD,珠打乱卡介苗,MTB溶酶体)和阴性对照组(HPV16E6重组蛋白)。测定和分析不同刺激下干扰素-γ的产生,并从每只小鼠体内的每一种情况中减去未受刺激样品中检测到的浓度。在第一次实验中,肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-17只在低水平出现在C3H小鼠体内。1B),因此在这一筛选中没有进行评估。三种抗原(Rv 0470,Rv 1733和Rv 3616)被强烈识别。MTB感染及卡介苗接种C3HeB/FEJ小鼠(即:IFN-γ产生>500 pg/ml)(图)。2B)。此外,尽管实验设置和实验室设置不同,MTB抗原(Rv 0287/88、Rv 1886、Rv 0470、Rv 1131、Rv 0440、Rv 1980、ESAT 6/CFP 10、Rv 3616、Rv 1733、Rv 1221和Rv 3052)被确认为重要的抗原。MTB在C3HeB/FEJ小鼠中的挑战(图)。2C)。有趣的是,除了ESAT 6/CFP 10(E/C),肽在IGRA检测中已经被广泛用作结核病诊断工具。27,Rv 0287/88、Rv 1886、Rv 1131、Rv 1221、Rv 1846和Rv 3052是干扰素-γ应答差异很大的抗原。MTB感染和卡介苗接种组(图1)。2C)。在FDR校正之前,MTB感染和卡介苗接种组仅对E/C(如预期)、Rv 3052和MTB溶解物。

这些发现共同证实、扩展和部分验证了11项免疫识别。MTB以前通过三种基因无关的小鼠结核病感染模型和两种不同的独立实验室环境在人类身上发现了抗原。

讨论

新的结核病候选疫苗的一个重要要求是,它们能唤起对以下疾病的免疫力。MTB在感染期间表达、加工并呈现给宿主免疫系统的蛋白质。在过去的几年里,我们发现了多个MTB免疫血细胞所识别的蛋白质MTB感染者和结核病患者3,9。在抗原选择过程中,我们选择了在整个感染过程中或在体内特定阶段高表达的基因编码的蛋白质。MTB感染3。在进入临床研究之前,需要对候选疫苗进行评估,并在动物研究中证明其具有免疫原性。11。因此,我们在这里研究了MTB我们在以前的体外人类研究中发现了抗原,并将其反向翻译成三种不同的、遗传和结核病易感性的小鼠结核病模型。我们发现在27组中MTB人类细胞识别的抗原,19能诱导至少一种三种细胞因子(干扰素-γ,肿瘤坏死因子-α,白细胞介素-17)的产生,至少一个组织检查的三个小鼠品系后,与MTB。进一步证实我们以前在人类队列中的数据是:MTB抗原诱导了大量的细胞因子反应,而非干扰素-γ。9,28。重要的是,按照目前的建议17,这些结果在第二个独立的实验室和实验环境(补充表)中得到了部分验证。1),显示对11项的认可。MTB感染C3HeB/FEJ小鼠的抗原其中三种抗原(即Rv 0470、Rv 1733和Rv 3616)在卡介苗接种后也被识别。后一项发现在考虑抗结核卡介苗疫苗的设计时是必要的。2.

总的来说,在第一个实验室进行的实验中,我们观察到了对MTB抗原的大小,细胞因子组合模式,组织和小鼠品系的变化(图)。1)。正如以前在人类研究中所观察到的9抗原诱导的细胞因子水平和类型的差异,或者某些抗原不能引起可检测的免疫反应的事实,与特定的蛋白质功能无关。有趣的是,经大量抗原(Rv 0470,Rv 0826,Rv 0991,Rv 1131,Rv 1221,Rv 1733,Rv 1846,Rv 1980,Rv 2034,Rv 2873,Rv 3353和Rv 3616)刺激后,耐药C57BL/6小鼠的脾脏和纵隔引流淋巴结出现了非IFN-γ反应,这与我们先前的研究结果一致。9以及最近在外周血中发现的非典型性的独立于γ的免疫应答。MTB暴露“抗性”个体28。C57BL/6小鼠细胞识别率显著提高MTB抗原含量高于BALB/c和C3HeB/FEJ小鼠。尽管C57BL/6和BALB/c小鼠对结核病同样有耐药性29,几个遗传决定因素可能是导致在识别抗原中发现的差异的原因之一。例如,与C57BL/6小鼠相比,BALB/c小鼠对肺部分枝杆菌感染的适应性1型免疫反应出现较晚,且较低。30,31。根据我们的发现,在抗原刺激的情况下,小鼠脾细胞和肺淋巴结细胞中干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α产生水平的降低已经被描述。31。出乎意料的是,我们发现c3heb/fej小鼠的肺和纵隔淋巴结细胞未能产生可检测到的tf-α,不仅是在此之后。MTB抗原暴露后,也有一些有丝分裂原阳性对照。在分枝杆菌感染过程中,tf-α缺陷小鼠发生坏死性肉芽肿,致病性病变也是c3heb/fej小鼠的特征。32,33。虽然从C3HeB/FEJ小鼠肺中分离出的细胞能产生肿瘤坏死因子-α,但其作用程度低于C57BL/6小鼠,这可能解释了它们发生坏死性病变的原因。C3heb/fej小鼠产生较低的肿瘤坏死因子α可能是由于功能衰竭的T细胞亚群大量过早积累所致,其特点是分泌白细胞介素2和肿瘤坏死因子α的能力有限。34。从纠正疫苗的角度来看,在结核病易感株中证明Mtb抗原的识别是特别重要的。通过用公认的抗原和适当的佐剂(如CAF 01)免疫小鼠,可以将这些菌株的细胞反应转向保护性反应(例如,在耐药菌株中发现的),例如ESAT 6,ESAT 6是活性结核病患者的一种强抗原蛋白,但在CAF 01中接种时也是一种强大的抗原。35.

从同一组织中分离出的两种抗原只有Rv 0287/88和Rv 0826。Rv 0287/88是esx-3分泌系统分泌的一种异二聚体,与MTB毒力与生存36,37。3种小鼠模型经Rv 0287/88刺激后,均产生IFN-γ,而BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠同时分泌TNF-α和IL-17。后者,脾细胞和纵隔淋巴结细胞对Rv 0287/88有反应,产生干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α。这些发现证实并扩展了CB6F1(BALB/c×C57BL/6)和B6C3F1(C57BL/6×C3HeB/FEJ)的肺T细胞,在21天后能够识别Rv 0287/88。MTB感染38。虽然Rv 0287/88抗原性的证据已经积累,但用卡介苗免疫的C3HeB/FEJ小鼠不能识别这种融合蛋白。这与另一项在结核病耐药菌株中进行的研究形成了对比,在该研究中,卡介苗接种小鼠的脾细胞对特定的rv 0288表位作出反应。39。Rv 0288是H4:IC 31的一部分,这是一种辅助性多蛋白疫苗,虽然具有免疫原性,但在最近的一项预防(持续)感染的临床试验中未能促进新生儿卡介苗的接种。4。在不同结核病易感性表型的卡介苗免疫小鼠中测试这种疫苗,可能会提供更好的预测人类的模型。

在早期阶段MTBRv 0826感染均为小鼠骨髓LN细胞所识别,主要诱导C57BL/6小鼠和BALB/c小鼠产生TNF-α,C3HeB/FEJ小鼠产生IFN-γ和IL-17。Rv 0826是一种功能未知的保守蛋白,在耐缺氧和广泛耐药过程中高表达。MTB菌株40,41。这些特征,再加上在人类身上发现的强大的细胞识别能力。42在老鼠身上,这种抗原会成为吸引人的靶子。然而,我们观察到所有小鼠脾细胞对Rv 0826的非特异性免疫反应是一致的,这在一个独立的实验中得到了证实。2B),值得进一步调查。这可能是由于与其他微生物抗原的交叉反应,例如微生物区系,但这仍然是推测的。

除Rv 0287/88和Rv 0826外,其他抗原在各组织和小鼠株间一致识别,比其他抗原(ESAT 6/CFP 10、Rv 3615、Rv 3616、Rv 1733、Rv 1221、Rv 1846、Rv 0991、Rv 2034、Rv 2873、Rv 3052和Rv 3353)更能产生多种细胞因子(Rv 1886、Rv 1791、Rv 0470、Rv 1131、Rv 0440、Rv 1980)。其中,rv0470c特别有趣,因为它是一种ive-tb抗原。MTB接种卡介苗后,在独立实验和不同实验室进行挑战。此外,Rv 0470虽然在易感小鼠中被识别,但在耐药菌株中诱导了不同程度和类型的细胞因子反应(见图)。1b,c)。Rv0470c是合成和环丙酸合成和环化必不可少的酶,对卡介苗和卡介苗的形态都有影响。MTB43,44。此外,rv0470c抑制人单核巨噬细胞吞噬体的成熟,而在小鼠中,它的缺失改变了巨噬细胞的持久性和病理学。MTB晚期感染43,45。值得注意的是,卡介苗0470增强了bcg启动的BALB/c小鼠迟发性超敏反应和Th1反应。46。所有这些特征,都得到了我们在老鼠和人类数据中的支持。9,10,指出rv0470c是一种有吸引力的卡介苗增强剂候选疫苗,当使用适当的佐剂提供时。47.

有趣的是,Rv 0287/88、Rv 1886、Rv 1131、Rv 1221、Rv 1846和Rv 3052虽然与牛M.蛋白质是除ESAT 6/cfp 10外的抗原,其IFN-γ反应在两种抗原之间差异很大。MTB感染组和卡介苗接种组(图1)。2C)9。结核病患者与非结核患者的特异性反应比较MTB暴露的卡介苗疫苗可能揭示这些抗原作为辅助结核病诊断工具的潜力。

总之,这项研究证明了对几个有前途的ive-tb的一致认可。MTB多重遗传与结核病易感性之间的抗原差异MTB受感染的小鼠品系,跨越不同的感染模型、组织和时间点进行评估,从而为评估提供了翻译工具。MTB合适的动物模型中的抗原。


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