生物素标记反应常用生物素琥珀酰亚胺酯进行。生物素是与抗体分子的游离赖氨酸等发生偶联反应而完成标记。其主要步骤是：
a. 用二甲基亚砜配制10mg/ml的N-羟琥珀酰亚胺生物素（应根据需要选用不同大小和间臂长的生物素化琥珀酰酯）。
b. 用硼酸钠缓冲液（0.1mol/L，PH8.0）稀释单抗溶液至1-3mg/ml。
c. 每毫克抗体加入25-250ug的生物素酯，混匀后，室温作用4小时。
e. 按每250ug生物素酯加入20ul 1mol/L NH4Cl终止反应，室温放置10分钟。
f. 以PBS充分透析除去游离生物素，标记抗体冻存。
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