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单克隆抗体制备-ABC-ELISA试验和Dot-ELISA试验

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发表时间:2019-07-12 17:20作者:武汉新启迪Xinqidi来源:http://www.qidibio.com

单克隆抗体制备-ABC-ELISA试验和Dot-ELISA试验

ABC-ELISA是在常规ELISA原理的基础上,增加了生物素(Biotin)与亲和素(Avidin)间的放大作用。亲和素有4个亚单位组成,对生物素有高度的亲合力。生物素很易与蛋白质共价结合。因此,结合了酶的亲和素与结合有抗体的生物素发生反应即起到了多极放大作用。其操作步骤如下:

a. 已知抗原的包被及加待检McAb样品,同间接ELISA试验。

b. 加生物素化抗鼠Ig抗体,每孔100ul37 1小时;洗涤。

c. 加酶标亲和素,每孔100ul37 30分钟洗涤;加底物显色,判定结果。


Dot-ELISA试验

免疫斑点试验(Dot-ELISA)是以硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜为固相载体,进行抗原抗体反应的免疫检测手段。该法采用不溶性底物(如DAB,或4-氯萘酚或AgNO3等),其与相应标记物(HRPAP、胶体金)作用形成不溶性产物,呈现斑点状着色,从而易于判定结果。根据所用的标记物不同,可分为HRP 免疫斑点试验、AP免疫斑点试验和免疫金银斑点法等。其操作步骤大致如下:

a. 将抗原液2-5ul点加于纤维素膜上,室温37干燥。

b. 将纤维膜浸入封闭液中,37 30分钟。

c. 用洗涤液洗2次,吸干后加待检McAb样品,37 1小时;用洗涤液振荡洗涤三次,每次5分钟,加HRPAP或胶体金标记的抗鼠Ig抗体,37作用30分钟。

d. 同法洗涤,吸干,用新配的相应底物溶液显色,然后水洗终止反应,观察结果。



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