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单克隆抗体制备-酶联免疫吸附试验(ELISA)

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发表时间:2019-07-12 17:14作者:武汉新启迪Xinqidi来源:http://www.qidibio.com

可溶性抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA


   单克隆抗体制备-ELISA

a. 纯化抗原用包被液稀释至1-20ug/ml

b. 50-100ul/孔量加入酶标板孔中,置4过夜或37吸附2小时。

c. 弃去孔内的液体,同时用洗涤液洗3次,每次3-5分钟,拍干。

d. 每孔加200ul封闭液4过夜或37封闭2小时;该步骤对于一些抗原,可省略。

e. 洗涤液洗3次;此时包被板可-204保存备用。

f. 每孔加50-100ul待检杂交瘤细胞培养上清,同时设立阳性、阴性对照和空白对照;37孵育1-2小时;洗涤,拍干。

g. 加酶标第二抗体,每孔50-100ul37孵育1-2小时,洗涤,拍干。

h. 加底物液,每孔加新鲜配制的底物使用液50-100ul3710-30分钟。

i. 2mol/L H2SO4终止反应,在酶联免疫阅读仪上读取OD值。

j. 结果判定:以P/N2.1,或PN 3D为阳性。若阴性对照孔无色或接近无色,阳性对照孔明确显色,则可直接用肉眼观察结果。


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