可溶性抗原的酶联免疫吸附试验（ELISA）
单克隆抗体制备-ELISA
a. 纯化抗原用包被液稀释至1-20ug/ml。
b. 以50-100ul/孔量加入酶标板孔中，置4℃过夜或37℃吸附2小时。
c. 弃去孔内的液体，同时用洗涤液洗3次，每次3-5分钟，拍干。
d. 每孔加200ul封闭液4℃过夜或37℃封闭2小时；该步骤对于一些抗原，可省略。
e. 洗涤液洗3次；此时包被板可-20℃或4℃保存备用。
f. 每孔加50-100ul待检杂交瘤细胞培养上清，同时设立阳性、阴性对照和空白对照；37℃孵育1-2小时；洗涤，拍干。
g. 加酶标第二抗体，每孔50-100ul，37℃孵育1-2小时，洗涤，拍干。
h. 加底物液，每孔加新鲜配制的底物使用液50-100ul，37℃10-30分钟。
i. 以2mol/L H2SO4终止反应，在酶联免疫阅读仪上读取OD值。
j. 结果判定：以P/N≧2.1，或P≧N 3D为阳性。若阴性对照孔无色或接近无色，阳性对照孔明确显色，则可直接用肉眼观察结果。
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