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单克隆抗体制备-细胞融合

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发表时间:2019-07-12 17:07作者:武汉新启迪Xinqidi来源:http://www.qidibio.com

细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养

    细胞融合的程序已报道的有很多种,这里介绍的是作者所在实验室常用的一种。
    A、 将1×108脾细胞与2×107-5×107骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14混合于一支50ml融合管中,补加不完全培养基至30ml,充分混匀。
    B1000r/min离心5-10分钟,将上清尽量吸净。
    C、 在手掌上轻击融合管底,使沉淀细胞松散均匀;40水浴中预热。
    D、 用1ml吸管在1分钟左右(最佳时间为45秒)加预热至4050% PEGPH 8.01ml,边加边轻轻搅拌。
    E、 用10ml吸管在90秒内加20-30ml预热至37的不完全培养基;20-37静置10分钟。
    F1000r/min 5分钟;弃去上清。
    G、 加入5ml HAT培养基,轻轻吹吸沉淀细胞,使其悬浮并混匀,然后补加含腹腔巨噬细胞的HAT培养基至80-100ml
    H、 分装96孔细胞培养板,每孔0.10-0.15ml;分装24孔板,每孔1.0-1.5ml;然后将培养板置376% CO2培养箱内培养。
    I5天后用HAT培养基换出1/2培养基。
    J7-10天后用HT培养基换出HAT培养基;(第14天后可用普通完全培养基)。
    L、 经常观察杂交瘤细胞生长情况,待其长至孔底面积1/10以上时吸出上清供抗体检测。


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