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干扰素的制备及检定(二)

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发表时间:2019-07-12 16:25作者:武汉新启迪Xinqidi来源:http://www.qidibio.com

干扰素的制备及检定


(三) 检定

1. 效价测定

(1) 制备攻击病毒:将水泡性口炎病毒(VSV)在鸡胚成纤维母细胞上传代后,再在猪细胞(IBRS)上传3~5代,使其对IBRS有良好致病效应,其TCID50应稳定(一般在10-6~10-7之间)。

(2) 准备测定细胞:生长良好的幼龄IBRS单层细胞。

(3) 测定:取上述单层细胞分为若干组,每组加不同稀释度的干扰素,置37℃孵育20~24h,然后每管均用100个TCID50的VSV攻击,置37℃ 48~72h孵育后,观察结果。同时设细胞对照组和病毒对照组。病毒对照组CPE>75%,正常细胞对照组CPE=0,即认为该测定系统有效。干扰素判定标准是以能保护半数细胞免受攻击病毒损害的干扰素最高稀释度的倒数作为干扰素的单位。

2.酸碱度测定取本品10支,加水溶解,精密测量pH值应为6~7.5。

3.水分测定按磺硫溶液法测定,不得超过3%。

4.安全试验取本品加水溶解,小鼠尾静脉注射,48h内不得有死亡。

5.热原检查取本品1支,加水溶解,依法检查,应符合规定。

6.菌检取本品3支,无菌水溶解,分别接种到检查需氧菌、厌氧菌及霉菌用培养基上,37℃培养1周,应无菌生长。

7.超敏反应取健康豚鼠6只,每只腹腔注射本品适量,连续3次,于20天后再于耳静泳注入本品适量,应无过敏反应现象发生。


(四) 注意事项

1.制备NDV F系弱毒诱生剂时,种毒应无菌检查合格,且滴度在1∶640以上。收毒时,应将污染的鸡胚弃去。

2.不必从血液中将白细胞提取出来,因红细胞对白细胞产生干扰素有营养作用。纯化的白细胞产生干扰素效价不一定高。

3.酸化的目的是杀死其中的诱生剂NDV,而在pH值2.0时,干扰素是稳定的。

4.在常温下干扰素半衰期很短。故各种操作要在低温环境下进行,动作要迅速,纯化所用试剂要作预冷处理。干扰素粗品及精品要及时置低温下存放。效价测定时,干扰素应于临用时现溶解。


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