动物组织总RNA的提取
【基本原理】
组织中的RNA主要分布在胞浆中，包括mRNA、tRNA和rRNA三种。mRNA含量最低，半衰期短，易于降解。在RNA 的提取过程中，主要采用强变性剂，如异硫氰酸胍等破坏细胞结构，失活RNA酶。细胞碎片、蛋白质等经酚、氯仿等有机溶剂抽提被去除。RNA提取的关键是防止内源性和广泛存在的外源性RNA酶，如器皿、试剂和手上等存在的RNA酶对核酸的降解作用，所用材料、器皿均需经DEPC处理（包括0.1%溶液浸泡过夜，蒸馏水冲洗及高压灭菌15min去除残存的DEPC）。真核生物中18S rRNA、28S rRNA经琼脂糖电泳后，在紫外灯下可观察到两条清晰的条带。
【器材】
电子天平、匀浆器、Ep 管、冰盒
【试剂】
1.TRIzol试剂（GIBCO BRL）
2.氯仿
3.异丙醇
4.75%乙醇
5.0.1% DEPC处理水
【操作步骤】
1.RNA提取
（1）称取0.2g新鲜肝组织, 加1ml TRIzol试剂制备肝匀浆，4℃孵育5min。
（2）加0.2 ml氯仿，盖紧盖后用力振摇15Sec ，然后在冰上放置5min。
（3）4℃，12 000×g, 离心15min。
（4）将上层水相移入另一管，加0.5 ml异丙醇，并在冰上孵育10min。
（5）4℃ 12 000×g 离心10min。
（6）弃上清，在沉淀（含RNA）中加1ml 75%乙醇洗涤，旋涡混匀。
（7）4℃，10 000×g 离心5min，得到RNA沉淀。
（8） 空气干燥后，用适量TE或无RNase水溶解备用。
２.RNA含量和纯度测定
分别测定所提取RNA样品的A 260 和A 280，并计算其比值。
3.电泳鉴定。
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