CCR5的表达水平可能影响炎症性T细胞向滑膜的迁移，从而影响JIA的易感性

CC趋化因子受体5(CCR 5)在滑膜T辅助细胞的聚集、诱导炎症过程及随后的滑膜炎和关节破坏中起着重要的作用。32碱基对插入/删除变体(CCR 5Δ32)在基因内部导致一个框架移位和一个非功能受体。CCR 5Δ32因其与幼年特发性关节炎(JIA)的关系而被调查，结果相互矛盾。本研究的目的是调查CCR 5Δ32与英国人口中的JIA有关。CCR 5Δ32在JIA案件中进行了基因分型(n=1054)和健康对照组(n比较基因型和等位基因频率。结合先前发表的研究，对我们的研究进行了元分析。CCR 5Δ32在这个英国数据集中，与不开发JIA的保护密切相关(P趋势OR=0.006.79 95%可信区间(95%CI)：0.66~0.94。对所有已发表的病例对照研究的Meta分析证实了与JIA的保护性联系(P=0.001或0.82 95%CI：0.73~0.93)。CCR 5Δ32CCR 5是决定T细胞表面受体数目的功能性变异体，推测CCR 5的表达水平可能影响炎症性T细胞向滑膜的迁移，从而影响JIA的易感性。

幼年特发性关节炎(JIA)是儿童时期最常见的慢性风湿病。它被定义为滑膜关节的慢性炎症，病因不明，从16岁开始，持续至少6周。有大量证据表明，其发病机制主要是由T细胞驱动的。1结果表明，与少关节或多关节JIA患者外周血T细胞相比，滑液T细胞(SF)T细胞的T-助手(Th)1细胞因子谱有很强的偏差，提示这种极化可能是趋化因子受体表达选择性募集所致。2CC趋化因子受体5(CCR 5)主要存在于单核细胞和T细胞上，尤其是Th1表型。3其功能是将这些Th1 T细胞募集到滑膜，在滑膜中积累并产生促炎细胞因子，如白细胞介素-2(IL-2)和干扰素-γ(介导炎症过程及随后的滑膜炎和关节破坏)。CCR 5与许多促炎趋化因子结合，包括CC趋化因子，如CCL 3(又称巨噬细胞炎性蛋白1α)、CCl 4(巨噬细胞炎症蛋白β)和CCL 5(也称为调节活化、正常T细胞表达和分泌)。4这些趋化因子在成人类风湿性关节炎(RA)患者的SF中被发现较高水平，5提示CCR 5+T细胞对这些趋化因子的存在有选择性地聚集在SF中。此外，还注意到细胞表面CCR 5密度决定了T细胞向RA滑膜细胞迁移的强度以及CCL 5对其刺激的强度。6因此，CCR 5的表达水平有利于关节内T细胞的炎症作用，其机制是促进T细胞对趋化因子的吸收，增强其对趋化因子的反应。因此，CCR 5在细胞上的密度可以预测疾病的严重程度。

这个CCR 5染色体3p21.3上的基因含有32个碱基对插入/缺失变异体(CCR 5Δ32)，导致帧移位和非功能受体。纯合性CCR 5Δ32结果表明CCR 5的表面表达完全缺失，而杂合子表达的细胞表面ccr 5密度低于野生型纯合子个体。CCR 5基因。7这一多态性在RA中得到了广泛的研究，并有相互矛盾的证据证明其具有保护作用。CCR 5Δ32多态8, 9, 10, 11, 12然而，对五项病例对照研究进行的大量元分析证实了两者之间的保护性联系。CCR 5Δ32RA：优势比(OR)0.65 95%可信区间(95%CI)：0.55~0.77，P<0.0001).13在JIA中，同样，结果是相互矛盾的；一项研究报告说CCR 5Δ32变异体与JIA有保护关系；14另一位成员说没有关联；15第三个发现CCR 5Δ32变异与JIA易感性有关。16本研究的目的是调查CCR 5Δ32与英国人群中的JIA有关，并将其结果与以往的Meta分析结果结合起来。

基因型计数符合Hardy-Weinberg预期(P>0.05)。经质量控制后，对987份JIA样品和3121份对照样品进行了分析。我们发现CCR 5Δ32变异体与保护不受JIA的影响密切相关(P趋势=0.006，OR 0.79 95%CI：0.66-0.94)(表1).

有趣的是，类风湿因子阳性多关节炎亚型的保护作用最强(OR 0.41 95%CI：0.18~0.93)。表2)；然而，所有亚型之间的等位基因频率没有显着性差异，这表明不存在任何亚型特异性关联。

为了进行Meta分析，对JIA先前的研究中的等位基因和基因型数据进行了整理(表3)。以前的三项研究是从文献检索中确定的：一项来自美国，14第二部分，挪威JIA病例与对照研究。15最后对巴西JIA病例和对照组进行了研究。16美国的研究是基于家庭的关联分析；因此，在元分析中，从父母和未受影响的兄弟姐妹收集的数据作为对照数据。来自美国和挪威的研究报告了非常相似的控制等位基因频率(10-11%)。然而，Scheibel在巴西研究中的控制等位基因频率等人差异很大(3.8%)。这项研究相对较小，据报道与CCR 5Δ32变异与JIA易感性。将这项研究纳入元分析导致了P-Breslow日测试的值为0.04，表明研究之间存在显著的异质性。考虑到这种异质性，元分析仅限于北欧后裔群体，巴西群体的结果不包括在集合OR的计算中。英国、美国和挪威研究的集合OR(布雷斯洛日)P=0.74)为0.82 95%CI：0.73~0.93，P=0.001。综合分析的意义更大一些。P-比我们的英国JIA研究发现的更有价值和更紧密的独联体(图1).

三种研究的元分析CCR 5Δ32变体。CCR 5基因的英国、美国和挪威JIA队列的Meta分析。森林样地显示了每项研究的优势比和95%的置信区间，并根据样本大小确定了每项研究的权重。三项研究的综合OR显示为一颗钻石，峰值表示置信区间的上限和下限。值低于1表示负(保护性)关联。Breslow-day检验是为了检验两项研究之间的异质性，结果表明这两项研究具有显着性差异。P-表明研究之间的异质性的价值。合并P-值显示在异质性下面P-价值。

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本次调查的结果和以往研究的Meta分析表明，CCR 5Δ32变体与保护北欧血统的个人免受JIA的影响有关。我们的研究是迄今为止调查这一关联的最大的一项研究，并且有超过80%的能力检测到保护或⩽0.75，类似于对RA的Prahalad Meta分析所确定的效应大小(OR=0.65)。13元分析强调了需要大量的样本来检测变异，但效果并不明显。

美国以家庭为基础的协会研究CCR 5Δ32变异体没有发现明显的传播偏差CCR 5Δ32在与JIA合并的先证者队列中。然而，开始时按年龄分层发现CCR 5Δ32明显低于早期JIA患者(<6年)。在英国，没有证据表明在发病年龄较小的病例中有更大的影响(P趋势=0.1，OR 0.83 95%CI：0.66~1.04；事实上，在发病时年龄较大的患者的疗效略强(P趋势0.0 3，OR 0.77 95%CI：0.60~0.97)。

在RA中也发现了同样的保护性关联，但与JIA一样，也有一些相互矛盾的结果；然而，对五项病例对照研究的Meta分析证实了两者之间的保护联系。CCR 5Δ32RA(OR 0.65%CI：0.55~0.77)P<0.0001). This is further evidence for shared susceptibility loci for RA and JIA, and adds to the evidence from other loci, which are associated with both diseases (and often other autoimmune diseases as well), such as PTPN 22, IL2/IL21区域，IL2RA, AFF 3, STAT 4, TRAF 1/C5和TNFAIP 3.17, 18, 19的确，CCR 5Δ32以前曾与预防I型糖尿病和腹腔疾病的发生有关，20暗示了泛自身免疫性疾病的作用。

对.的影响CCR 5Δ32在RA的临床过程中也进行了调查，但同样的证据也是相互矛盾的，最近的研究发现，缺失的携带者保护关节不受侵蚀，关节外表现较少，累积C反应蛋白水平较低。21然而，其他一些研究没有发现与疾病严重程度或结果有关的证据。10, 22, 23这些差异可能是由于所使用的统计能力和方法的不同而产生的，但考虑到CCR 5的表达水平可能与严重程度有关这一事实，有必要调查一下是否存在这种差异。CCR 5Δ32对JIA的结果有任何影响。CAPS(儿童关节炎前瞻性研究)是一项关于JIA病例的前瞻性初步队列研究，其数据在探索这一假设方面将是非常宝贵的，但目前没有足够的动力进行这些调查。

观察到有6例JIA病例是纯合的CCR 5Δ32提示趋化因子系统可能存在一定的冗余，其他受体和配体可能在JIA的发生发展中起一定作用。先前的一项研究发现，与外周血T细胞相比，20例JIA患者的T细胞上有两种趋化因子受体CCR 5和CXCR 3的高表达。2在这项研究中，其中一位JIA患者是纯合子的。CCR 5Δ32但也许令人惊讶的是，它是更严重的扩展性少关节炎亚型中的一种。该个体在SF T细胞上有较高水平的CXCR 3，在细胞因子刺激试验中具有较高的干扰素-γ：IL4比值。在大多数情况下，SF T细胞对CCR 5和CXCR 3双阳性，但T细胞可以表达其中一种或另一种。不同的共表达也表明这两种受体的水平受不同因素的调节。

已经有人提出CCR 5是重要的征集Th1 T细胞到关节，但有趣的是，许多研究已经将CCR 5与IL2通路联系起来。例如，IL2上调CCR 5的表达。体内和离体24, 25, 26而雷帕霉素，一种破坏IL2受体信号的药物，降低了CCR 5在T细胞上的表达。27最近的一项研究发现CCR 5Δ32/Δ32抗CD3/CD 28刺激的外周血单个核细胞供者白细胞介素2的产生明显低于未携带抗CD3/CD 28细胞的人。CCR 5Δ32突变。结果表明，CCR 5影响CD4+T细胞的IL2转录水平，CCR 5影响CD4+T细胞IL2RA/CD 25的表达。离体和体内...有证据表明，这些效应是通过活化T细胞信号通路的核因子介导的。CCR 5的表达也能促进T细胞活化后的T细胞增殖。28这很吸引人，因为IL2基因区19, 29和IL2RA基因30也与JIA有关。有趣的是，在所有三种情况下，基因/区域的SNP与JIA的保护有关。

最后，我们提出了保护协会的证据。CCR 5Δ32在英国JIA病例控制队列中的变异，通过元分析结合以前两项关于北欧裔人群的研究获得的数据得到加强。目前还需要进一步研究该基因如何参与JIA的发病机制。

学科

1054名英国白种人JIA患者(男332人，女715人)的DNA可从三个来源获得：BSPAR(英国儿科和青少年风湿病学会)n一组长期持有JIA的英国白种人患者(n=201)，如前所述；31作为CAPS的一部分，收集了第三个队列，这是来自英国五个中心的JIA病例的前瞻性开始队列研究(n=199).32贾氏病例按ILAR标准分类。33 (补充表1)。健康白种人对照DNA样本(n如上文所述，可从联合王国的五个中心获得：34曼彻斯特、谢菲尔德、利兹、阿伯丁和牛津(质量控制后的总控制样本数=3121)。所有个人都是在道德认可下招募的，并提供了知情同意(西北多中心研究道德委员会(MREC 99/8/84)和曼彻斯特大学人类道德研究委员会)。

基因分型

这个CCR 5Δ32变异体(Rs 333)是根据制造商的指示使用Sequenom iPlex MassARRAY平台进行基因分型的(Sequenom，San Diego，CA，USA；http://www.sequenom.com/)。样品质量控制率为90%，基因分型成功率为90%。

统计分析

利用Qanto进行功率计算，计算当前样本在等位基因频率上检测关联的先验概率，并在其他自身免疫性疾病中报道该变异体的影响大小。14计算假定为对数加性模型，α值为0.05，效果大小为0.75。用plink进行Cochrane-Armitage趋势检验，比较JIA患者和对照组的基因型和等位基因频率。http://pngu.mgh.harvard.edu/purcell/plink/),35并计算了等位基因OR值及其95%的顺式。JA是一种典型的异质性疾病，应用ILAR分类标准，可分为临床上较为同质的疾病。36然而，将每种ILAR亚型分别与对照进行比较，将产生大量的假设检验。因此，我们还检查了是否有证据表明，在七种ILAR亚型之间存在等位基因频率的差异。亚型间的差异用χ评估。2-在7×2表上进行测试。

发表的病例对照研究CCR 5Δ32使用PubMed搜索确认了JIA。从已发表的研究中获得基因型和等位基因频率。采用Breslow-Day检验进行了队列间异质性测试，并采用cochran-mantel-haenszel检验对三个队列进行了元分析。