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标记酶与蛋白质的交联

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发表时间:2019-03-14 11:18作者:武汉新启迪Xinqidi来源:http://www.qidibio.com

  在使用抗体的过程中,大多数时候需要标记各种酶,用酶促反应实现抗原的示踪或者定量分析。酶的本质是蛋白质,因此,酶对蛋白抗原、抗体的标记,实质上就是两种不同蛋白质之间的交联。酶与蛋白质之间的交联反应,主要受到蛋白质分子内所具有的适合于偶联的化学功能团类型和数量的限制,大部分交联反应是通过蛋白质分子中的 a—和ε—氨基、亚氨基和琉基的亲核性质,常用的交联方法主要是利用 a—氨基作为交联部位。

  由于交联双方具有多种不同的反应功能团,故可据此选用不同的交联方法和交联剂。交联剂有多种,如单功能、双功能和多功能试剂。双功能试剂又可分为同型和异型两类,其中多数都可用于酶与蛋白质的交联。戊二醛法和高碘酸钠法是最通用的方法,而又以后者为最佳;二马来酰亚胺、氟二硝基苯砜、苯醌等方法也可采用。当酶与抗体蛋白用同型双功能试剂进行交联时,常常形成不均一的混合物,—有酶与抗体蛋白的结合物,也有酶—酶、抗体蛋白—抗体蛋白自身结合而形成的聚合物同时存在。为克服同型双功能交联剂的这种缺点,可采用一类新型的交联剂——异型双功能试剂,其中,目前应用较多的一种是N—琥珀酰亚胺基3—(2—吡啶基二硫)丙酸酯(简称SPDP),使用SPQ可将酶与抗体蛋通过两者的氨基进行交联,而不会形成酶或蛋白的自身聚和物。新近,生物素—亲和素系统(Biotin—AYidin System,BAS)的引用是标记技术一重大进展,巳用于酶对抗原或抗体,以及多种物质的交联标记,它可明显地提高标记效率。利用BAS制备的酶标结合物,除具有抗原—抗体专一结合的特点外,还具有生物素—亲和素系统的特异亲和性,因此,结合物亦具有高度的专一性,同时也就显、著地增加了ELISA和EMIT的测定灵敏度。

       详细交联方法,请下载PDF文件

       酶与蛋白质的交联


文章分类: 抗体技术资料
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