固相溶血试验(以鼻疽为例)
(solid phasehemolysis test,SPHLT)
(一) 原理固相溶血试验是借鉴了单扩散溶血试验(single radial hemoly
sis test，或称被动溶血技术)而建立的一项血清学新技术。在红细胞表面吸附上抗原，与
同种抗体作用形成抗原抗体复合物，在补体存在的条件下，通过传统途径激活补体，可以使
红细胞发生溶血。如果加入的抗体与吸附在红细胞表面的抗原不相对应，则不能激活补体，
也就不能发生溶血。试验中，可根据反应孔周围出现的溶血环直径大小，进行结果判定。
(二) 材料和方法
1 材料①鼻疽抗原、鼻疽阳性及阴性血清、冻干补体鼻疽抗原作1∶5、鼻疽阳性及阴
性血清作1∶2、冻干补体作1∶3稀释；
②1/2万的鞣酸液；
③绵羊红细胞；
④1%琼脂糖凝胶。
2 方法
(1) 绵羊红细胞鞣酸化：绵羊红细胞用pH值72 PBS连续洗3次，每次均为
3 000 r/min 3mi
n。取洗过的压积红细胞04ml，加入pH值72 PBS 16ml，制成20%绵羊细胞悬液，使与1
∶2万鞣酸液等量混合，置37℃水浴槽中感作15min，再以pH值72 PBS洗3次。
(2) 绵羊红细胞致敏：取压积的鞣酸化红细胞与用pH值64 PBS配制的鼻疽
抗原等量混合，置37℃水浴槽中感作30min，然后用pH值72 PBS洗3次。
(3) 凝胶盘制备：取抗原致敏的压积红细胞33ml，加往融化后冷至55℃1%
琼脂糖凝胶100
ml中混匀，浇入塑料反应盘中，每盘约25ml。凝固后，以直径6mm打孔器在反应盘上打孔
两列，每列5孔。
(4) 加入要素及感作：将鼻疽血清和补体等量混合，以微量滴管加入到致敏
红细胞琼脂糖凝胶反应盘的孔中，每孔0025ml；然后置室温下作用3～4h后进行结果判定
。
(三) 结果判定
阳性反应：溶血环直径在81mm以上者；
疑似反应：溶血环直径在71～80mm之间者；
阴性反应：溶血环直径在60～70mm之间者。
(四) 注意事项
1 补体浓度对SPHLT发生溶血反应的性质有一定影响。补体浓度过高，可单独引起轻度
溶
血，检测阴性血清时，能出现弱溶血反应；若浓度过低，虽为阳性血清，也不能引起足够强
度的溶血反应，易造成假阴性；应用1∶3倍左右的补体则不致造成检测误差。
2 血清抗体的含量与SPHLT产生的溶血环的直径成正比关系。稀释度降低，则溶血环直
径
增大，反之则减小，为使各种强度的阳性血清均可被检出，又不与其他血清发生非特异性的
交叉反应，采用1∶2被检血清为适当。
3 抗原对SPHLT引起的溶血强度，随抗原浓度而变化，浓度高者，引起溶血反应强，反
之则降低。实施反应时以1∶5为适宜。
4 实施反应时，在15～29℃与4℃下感作，出现的溶血反应强度基本相同，而且于第3～4h
即可看到明显的溶血现象，于第12h稍微增加，延长感作时间，溶血强度也不再增加。因此
于第3～4h即可终判。在37℃恒温箱中感作，溶血现象不明显，不宜采用这种温度感作。
5 对稀释液的要求不甚严格，可用生理盐水代替PBS，不影响实验结果。
6 因为一般琼脂中含有抗补体物质，琼脂胶又能在一定程度上阻碍血清的扩散。因此用琼
脂糖较为合适。
7在制备反应盘及打孔中的注意事项与固相补体结合反应相同。
|
|
