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固相溶血试验(以鼻疽为例)

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发表时间:2019-11-22 11:19作者:武汉新启迪Xinqidi来源:www.qidibio.com

固相溶血试验(以鼻疽为例)

(solid phasehemolysis test,SPHLT)

(一) 原理固相溶血试验是借鉴了单扩散溶血试验(single radial hemoly

sis test,或称被动溶血技术)而建立的一项血清学新技术。在红细胞表面吸附上抗原,与

同种抗体作用形成抗原抗体复合物,在补体存在的条件下,通过传统途径激活补体,可以使

红细胞发生溶血。如果加入的抗体与吸附在红细胞表面的抗原不相对应,则不能激活补体,

也就不能发生溶血。试验中,可根据反应孔周围出现的溶血环直径大小,进行结果判定。

(二) 材料和方法

1 材料①鼻疽抗原、鼻疽阳性及阴性血清、冻干补体鼻疽抗原作1∶5、鼻疽阳性及阴

性血清作1∶2、冻干补体作1∶3稀释;

②1/2万的鞣酸液;

③绵羊红细胞;

④1%琼脂糖凝胶。

2 方法

(1) 绵羊红细胞鞣酸化:绵羊红细胞用pH值72 PBS连续洗3次,每次均为

3 000 r/min 3mi

n。取洗过的压积红细胞04ml,加入pH值72 PBS 16ml,制成20%绵羊细胞悬液,使与1

∶2万鞣酸液等量混合,置37℃水浴槽中感作15min,再以pH值72 PBS洗3次。

(2) 绵羊红细胞致敏:取压积的鞣酸化红细胞与用pH值64 PBS配制的鼻疽

抗原等量混合,置37℃水浴槽中感作30min,然后用pH值72 PBS洗3次。

(3) 凝胶盘制备:取抗原致敏的压积红细胞33ml,加往融化后冷至55℃1%

琼脂糖凝胶100

ml中混匀,浇入塑料反应盘中,每盘约25ml。凝固后,以直径6mm打孔器在反应盘上打孔

两列,每列5孔。

(4) 加入要素及感作:将鼻疽血清和补体等量混合,以微量滴管加入到致敏

红细胞琼脂糖凝胶反应盘的孔中,每孔0025ml;然后置室温下作用3~4h后进行结果判定

(三) 结果判定

阳性反应:溶血环直径在81mm以上者;

疑似反应:溶血环直径在71~80mm之间者;

阴性反应:溶血环直径在60~70mm之间者。

(四) 注意事项

1 补体浓度对SPHLT发生溶血反应的性质有一定影响。补体浓度过高,可单独引起轻度

血,检测阴性血清时,能出现弱溶血反应;若浓度过低,虽为阳性血清,也不能引起足够强

度的溶血反应,易造成假阴性;应用1∶3倍左右的补体则不致造成检测误差。

2 血清抗体的含量与SPHLT产生的溶血环的直径成正比关系。稀释度降低,则溶血环直

增大,反之则减小,为使各种强度的阳性血清均可被检出,又不与其他血清发生非特异性的

交叉反应,采用1∶2被检血清为适当。

3 抗原对SPHLT引起的溶血强度,随抗原浓度而变化,浓度高者,引起溶血反应强,反

之则降低。实施反应时以1∶5为适宜。

4 实施反应时,在15~29℃与4℃下感作,出现的溶血反应强度基本相同,而且于第3~4h

即可看到明显的溶血现象,于第12h稍微增加,延长感作时间,溶血强度也不再增加。因此

于第3~4h即可终判。在37℃恒温箱中感作,溶血现象不明显,不宜采用这种温度感作。

5 对稀释液的要求不甚严格,可用生理盐水代替PBS,不影响实验结果。

6 因为一般琼脂中含有抗补体物质,琼脂胶又能在一定程度上阻碍血清的扩散。因此用琼

脂糖较为合适。

7在制备反应盘及打孔中的注意事项与固相补体结合反应相同。


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