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固相补体结合试验(以鼻疽为例)

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发表时间:2019-11-22 11:09作者:武汉新启迪Xinqidi来源:www.qidibio.com

固相补体结合试验(以鼻疽为例)

(solid phase complementfixation test,SPCFT)

(一) 原理与直接补体结合反应的原理相同(图331),即以是否溶血为

标志,间接测定补体是否被特异的抗原抗体复合物所消耗的一种血清学反应。如果不溶血

331补体结合试验原理

示意图

称为固相补体结合试验阳性;发生溶血,则称为固相补体结合试验阴性。由于该试验是在琼

脂糖凝胶反应盘中进行的,因而使反应用要素和反应结果固相化,故名。

(二) 材料和方法

1 1%琼脂糖凝胶琼脂糖1g,加入生理盐水100ml中,煮沸融化备用。

2 1%溶血素。

3 压积绵羊红细胞用生理盐水以3 000 r/min洗3次,每次3min。

4 冻干补体及鼻疽抗原。

5 被检血清及标准阳性、阴性鼻疽血清。

6 本试验的操作方法:

(1) 溶血系统琼脂糖凝胶反应盘的制备及打孔:取1%溶血素溶液32ml与压

积绵羊红细胞08ml混合,置37℃水浴槽中感作30min,即为致敏红细胞液。吸取致敏红细

胞液33ml,加入融解后冷至51~55℃的1%琼脂糖凝胶100ml中,混匀,倾注入特制的塑料

反应盘内,每盘约25ml。待其凝固后,用直径6mm打孔器打孔,每盘打孔两列,每列4孔,

孔距不得小于8mm(图332)。

332琼脂凝胶反应盘的制备及打

孔示意图

(2) 溶菌系统的处理、加入及感作:将1∶2稀释的被检血清与1∶50的鼻疽抗

原及1∶2倍的

补体等量混合,放37℃恒温箱中感作1h后,用微量吸管吸取以上三者的等量混合物25μl,

加入制备好的致敏红细胞琼脂糖凝胶反应盘的孔中,然后将加过溶菌系统的反应盘置37℃恒

温箱中感作25~3h后,观察结果。注意每次试验应作标准阳性血清及阴性血清、抗原及补

体的对照,每个对照孔诸要素的混合、感作及滴加量,均与试验孔相同。

(三) 结果判定所设对照必须是阳性血清孔周围完全不溶血,其余三个对

照孔必须出现大而

透明的溶血环,方说明反应条件正常,才能对每份被检血清试验孔的结果进行判定。即根据

每份血清对照孔与试验孔之间发生的溶血环直径差的大小确定结果:

阳性反应:溶血环直径差为06mm以上者;

疑似反应:溶血环直径差为01~05mm之间;

阴性反应:溶血环直径差为0者。

(四) 注意事项

1 一块25×75cm的致敏红细胞反应盘一般打孔两行,每行不超过4孔,孔距不低于8mm

,否则由于打孔过多,孔距太近,容易产生溶血排斥现象,严重的可影响试验结果。

2 在制备致敏红细胞反应盘时,还必须注意厚度均一,应于呈水平的台面上浇制为宜,否

则反应盘两端的琼脂糖厚度不同,势必造成薄者溶血环大,厚者溶血环小。3 特异性及

敏感性,在固相补反中,除与类鼻疽血清发生明显的交叉反应外,与被试的其

它多种血清均不发生交叉反应。这种方法对鼻疽马的检出率比直接补体结合反应高,且操作

简单。依本方法的原理还可用于马传贫抗体及流行性乙型脑炎病毒抗原的检测。


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