间接炭凝集试验(以马副伤寒性流产为例)
(indirect carbonal agglutination test)
(一) 原理该血清反应是以炭粉颗粒为载体，将已知的马副伤寒性流产血
清吸附在该载体表
面上，形成抗体炭粉结合物，即为诊断马副伤寒性流产用的炭粉致敏血清。炭粉致敏血清
与相应抗原相遇时，在电解质的参与下，二者发生特异结合，便形成肉眼可见的炭微粒凝集
块，液体变得清朗，即为阳性反应。如果二者不结合，炭粉则堆积于液滴中央，成为一个摇
而不散的黑炭团，即为阴性反应。
(二) 材料和方法
1 材料
(1) 炭粉：炭粉的粒度最好在0015～0125mm的范围内，如达不到这个标
准，用前需做预
处理，常用的方法是离心法。即取30g炭粉放入大离心管中，加蒸馏水100ml，边摇边研磨，
直至均匀的分散开为止，然后以300 r/min离心3～5min，弃去沉下的粗炭粉，取含细炭粉
的上液以3 000 r/min离心30min，去上清液，沉于离心管底的沉淀物，即为供致敏用的
湿炭
粉。此外，也可用过筛法处理炭粉，即将木炭粉置乳钵中研磨后，再用300目/口寸的标准筛过筛，收集筛后的炭粉备用，用此法筛选的
炭粉颗粒较大，适合于以塑料盘做反应时应用。
(2) 马副伤寒性流产高免血清，pH值64 PBS，被检抗原等。
2 方法
(1) 致敏炭血清的制备：取湿炭粉025g，加1∶400稀释的马副伤寒性流产
高免血清(以马流产沙门氏菌制备H抗原，免疫家兔制成，效价不低于1∶5 600，56℃ 3
0min处理，用前用pH值64 PBS稀释)3ml，混匀后，于37℃水浴中致敏60min，其间不断振
摇，取出后，以3 000 r/min离心10min，去上清液，向沉淀物中加入pH值64 PBS 5ml
，以3 000 r/min离心10min，去上清液，按同样的方法洗一次后，再往沉淀物中加1%兔
血清(56℃ 30min灭活)、1%硼酸pH值64 PBS 5ml，混匀，以3 000 r/min离心10min，
去上清液，最后向沉淀物中加入1%兔血清、1%硼酸pH值64 PBS 3ml及1%硫柳汞溶液003m
l，充分混匀后，即为诊断马副伤寒流产用炭血清。
对照用炭正常血清的制备，系以56℃ 30min灭活的正常家兔血清代替马副伤寒性流产高免血
清，按上述方法制备。
(2) 操作方法：取20×40cm玻璃板一块，用1ml吸管往玻璃板上依次滴加不同
稀释度的马流
产沙门氏菌肉汤培养物01ml，对照用溶液01ml。再用另一支1ml吸管往每一滴菌液中及
对照的液滴中滴加免疫炭血清及正常炭血清005ml，用小木棒充分搅拌，在1～5min内按以
下标准判定结果。
(三) 结果判定
++++全部炭粉迅速凝集，液滴清朗；
+++大部分炭粉凝集，液滴较透明；
++约50%的炭粉凝集，另50%的炭粉呈黄豆大胶粘在一起，摇而不散；
+少量的炭粉被凝集，液滴不透明，振摇时，胶粘的炭粉牢固地堆集在一起；
-炭粉不凝集，液滴不透明，胶粘的炭粉牢固地堆集在一起。
判定时，在全部对照正确的情况下，以“＋＋”以上的反应强度定为阳性反应。该试验可检
出每毫升2 500万个以上的马流产沙门氏菌标本。
(四) 注意事项
1 炭粉粒的大小对试验影响较大，使用的炭粉不符合标准时，应作预处理。
2 使用的免疫血清效价要高，低时，使用前的稀释倍数也应相应地降低。
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