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间接炭凝集试验(以马副伤寒性流产为例)

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发表时间:2019-11-22 11:09作者:武汉新启迪Xinqidi来源:www.qidibio.com

间接炭凝集试验(以马副伤寒性流产为例)

(indirect carbonal agglutination test)

(一) 原理该血清反应是以炭粉颗粒为载体,将已知的马副伤寒性流产血

清吸附在该载体表

面上,形成抗体炭粉结合物,即为诊断马副伤寒性流产用的炭粉致敏血清。炭粉致敏血清

与相应抗原相遇时,在电解质的参与下,二者发生特异结合,便形成肉眼可见的炭微粒凝集

块,液体变得清朗,即为阳性反应。如果二者不结合,炭粉则堆积于液滴中央,成为一个摇

而不散的黑炭团,即为阴性反应。

(二) 材料和方法

1 材料

(1) 炭粉:炭粉的粒度最好在0015~0125mm的范围内,如达不到这个标

准,用前需做预

处理,常用的方法是离心法。即取30g炭粉放入大离心管中,加蒸馏水100ml,边摇边研磨,

直至均匀的分散开为止,然后以300 r/min离心3~5min,弃去沉下的粗炭粉,取含细炭粉

的上液以3 000 r/min离心30min,去上清液,沉于离心管底的沉淀物,即为供致敏用的

湿炭

粉。此外,也可用过筛法处理炭粉,即将木炭粉置乳钵中研磨后,再用300目/口寸的标准筛过筛,收集筛后的炭粉备用,用此法筛选的

炭粉颗粒较大,适合于以塑料盘做反应时应用。

(2) 马副伤寒性流产高免血清,pH值64 PBS,被检抗原等。

2 方法

(1) 致敏炭血清的制备:取湿炭粉025g,加1∶400稀释的马副伤寒性流产

高免血清(以马流产沙门氏菌制备H抗原,免疫家兔制成,效价不低于1∶5 600,56℃ 3

0min处理,用前用pH值64 PBS稀释)3ml,混匀后,于37℃水浴中致敏60min,其间不断振

摇,取出后,以3 000 r/min离心10min,去上清液,向沉淀物中加入pH值64 PBS 5ml

,以3 000 r/min离心10min,去上清液,按同样的方法洗一次后,再往沉淀物中加1%兔

血清(56℃ 30min灭活)、1%硼酸pH值64 PBS 5ml,混匀,以3 000 r/min离心10min,

去上清液,最后向沉淀物中加入1%兔血清、1%硼酸pH值64 PBS 3ml及1%硫柳汞溶液003m

l,充分混匀后,即为诊断马副伤寒流产用炭血清。

对照用炭正常血清的制备,系以56℃ 30min灭活的正常家兔血清代替马副伤寒性流产高免血

清,按上述方法制备。

(2) 操作方法:取20×40cm玻璃板一块,用1ml吸管往玻璃板上依次滴加不同

稀释度的马流

产沙门氏菌肉汤培养物01ml,对照用溶液01ml。再用另一支1ml吸管往每一滴菌液中及

对照的液滴中滴加免疫炭血清及正常炭血清005ml,用小木棒充分搅拌,在1~5min内按以

下标准判定结果。

(三) 结果判定

++++全部炭粉迅速凝集,液滴清朗;

+++大部分炭粉凝集,液滴较透明;

++约50%的炭粉凝集,另50%的炭粉呈黄豆大胶粘在一起,摇而不散;

+少量的炭粉被凝集,液滴不透明,振摇时,胶粘的炭粉牢固地堆集在一起;

-炭粉不凝集,液滴不透明,胶粘的炭粉牢固地堆集在一起。

判定时,在全部对照正确的情况下,以“++”以上的反应强度定为阳性反应。该试验可检

出每毫升2 500万个以上的马流产沙门氏菌标本。

(四) 注意事项

1 炭粉粒的大小对试验影响较大,使用的炭粉不符合标准时,应作预处理。

2 使用的免疫血清效价要高,低时,使用前的稀释倍数也应相应地降低。


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