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间接乳胶凝集试验(以炭疽为例)

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发表时间:2019-11-22 11:08作者:武汉新启迪Xinqidi来源:www.qidibio.com

间接乳胶凝集试验(以炭疽为例)

(indirect latex agglutination test)

(一) 原理所用乳胶系人工合成的聚苯乙烯乳胶,它是由06~07μm球

形小颗粒组成的胶

体溶液,该胶体溶液对高分子蛋白之类的物质具有良好的吸附性能。故在试验时,以其为载

体,将炭疽抗体球蛋白吸附在乳胶颗粒表面上,制成所谓的炭疽乳胶诊断血清,当与特异抗

原相遇时,乳胶颗粒即被动凝集在一起,在液滴中形成肉眼明显可见的乳胶凝集块,即为阳

性反应,如仍为均匀混浊的乳状悬液,则为阴性反应。

(二) 材料与方法

1 材料聚苯乙烯乳胶、炭疽高免血清、炭疽芽胞抗原、pH值72 PBS、pH值82 硼酸

缓冲液等。

2 方法

(1) 乳胶致敏前的处理:乳胶在致敏前,进行预处理的目的是为了增加乳胶

的稳定性,提高其吸附力,减少非特异性凝集。通常按下述方法处理。

10%乳胶原液1ml,加双蒸馏水4ml稀释成2%,再加pH值82 BBS(即硼酸缓冲盐水,由Na

2B4O7·H2O 667g,H3BO3804g,NaCl85g溶于1000ml双蒸馏水中制成)12ml

1%胰酶溶液(用pH值82 BBS配制)2ml,充分混匀,置45℃水浴槽中作用13h,以10000 r/

min离心30min,弃去上清,往沉积的乳胶中加入pH值82 BBS 10ml,轻轻摇匀,即为1%乳

胶悬液。

(2) 致敏乳胶血清的制备:以pH值72 PBS将炭疽高免血清稀释成1∶20后,

56℃水浴槽中作用30min,取02ml缓慢地滴加于1%乳胶悬液1ml中,滴加血清时要边加边

振摇,以促进吸附,然后将其置于56℃水浴槽中致敏2h,中间摇动2~3次,再置室温下稳定

4h即成。为使致敏的乳胶能长期保存,可加01%硫柳汞防腐,置4℃冰箱中保存,其有效期

不少于一年,但应注意,绝不能冻结。

对照乳胶正常血清,系以健马血清按上述方法处理乳胶悬液制成。以上两种乳胶血清眼观都

呈均匀的乳状,在显微镜下检查,见悬液中有许多均等散在的球状小颗粒,绝无自凝现象,

02%NaCl溶液混合时,也不发生凝集。

(3) 操作方法:用1ml吸管吸取被检标本液往玻板上分别滴加二滴,每滴01

ml,再用另1支

1ml吸管吸取标准炭疽抗原,也往同一玻板上的另一侧分别滴加二滴,每滴也为01ml,再

2支吸管分别往标本滴及炭疽标准抗原滴中滴加炭疽乳胶血清及正常乳胶血清各005ml后

,用小木棒把上述四个滴液混合均匀,静置于室温下,于5min内按以下标准判定结果。

(三) 结果判定观察反应时,最好将反应盘放在黑纸上,于光线明亮处进

行。判定时,首先观察三个对照滴,且应出现下述结果:

炭疽乳胶血清加标准炭疽抗原:++++;

正常乳胶血清加被检标本:-;

正常乳胶血清加标准炭疽抗原:-。

只有出现上述结果,方说明反应条件正常,才能对被检标本的结果作判定。即炭疽乳胶血清

与被检标本滴发生反应者为阳性,不发生反应者为阴性。本反应可检出每毫升中含78万个

以上的炭疽芽胞标本。

判定反应的强度标准为:

++++乳胶全部凝集,呈絮状团块,飘浮于清亮的液滴中;

+++大部分乳胶凝集成细小颗粒,液滴混浊;

++半量乳胶凝集成细小颗粒,液滴混浊;

+仅少量乳胶凝成肉眼可见的颗粒,液滴混浊;

-全部乳胶仍呈均匀的乳状。

“++”作为判定反应的终点。

(四) 注意事项

1 乳胶性质脆弱,易受各种理化学因素的影响发生自凝现象,失去使用价值。为阻止试验

中乳胶自凝现象的发生,提高对免疫血清的吸附力,减少制成的乳胶产生非特异性反应,所

用乳胶悬液,一律用胰酶处理后再作试验。需要注意的是,处理过的乳胶悬液不能久放,超

3天后应用,吸附血清的能力明显下降。

2 制备乳胶炭疽血清时,免疫血清的用量必须严格优选,用量过大,如1∶10时,会一定

程度地抑制乳胶炭疽血清与特异抗原发生反应,用量过小,不但自身凝集,而且与盐水对照

也发生凝集。

3 被检抗原的处理方法,可直接影响乳胶炭疽血清的检出率。以煮沸杀菌法处理标本较简

单,且对结果影响较小。


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