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对流免疫电泳(counter immune electrophoresis)

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发表时间:2019-11-22 10:57

对流免疫电泳(counter immune electrophoresis)

1 原理对流免疫电泳又叫反向免疫电泳或免疫电渗电泳。其原理为:在pH值86的琼脂

胶中,抗体球蛋白只带有微弱的负电荷,而且它分子又较大,所以泳动慢,受电渗作用的影

响也大,往往不能抵抗电渗作用,故在电泳时,反而向负极倒退。而一般抗原蛋白质常带较

强的负电荷,分子又较小,所以泳动快,虽然由于电渗作用泳动速度减慢,但仍能向正极泳

动。如将抗原置阴极,抗体置阳极,电泳时,两种成分相对泳动,一定时间后抗原和抗体将

在两孔之间相遇,并在比例适当的地方形成肉眼可见的沉淀线。这样由于电泳的作用,不仅

帮助抗体定向移动,因而加速了反应的出现,而且也限制了琼脂扩散时,抗原抗体向四周自

由扩散的倾向,因而也提高了敏感性,本法比琼脂扩散法的灵敏度要高10~16倍。

2 材料和方法

312对流免疫电泳抗

原抗体孔的排列

(1) 制备琼脂板:

①首先配制pH值86,μ=0075的巴比妥缓冲液(配法:巴比妥钠1545g,巴比妥276g

,蒸馏水加至1 000ml)。然后取优质琼脂粉1~12g加到巴比妥缓冲液100ml中,配成

巴比妥琼脂;

②琼脂板的大小可根据需要选择,一般多用宽7(或5)cm,长12(或75)cm玻璃板,将其

洗净后,烘干。制板时,将上述琼脂溶化,凉至56℃左右,用吸管吸取溶化琼脂加在玻璃板

上,使琼脂厚3mm左右,待琼脂凝固后打孔,孔的直径3mm,两行相距5mm,同一玻板放

置两排或三排抗原抗体对,每排间距26mm,具体如图312。

(2) 加样品:用滴管分别吸取抗原和抗体,直接加入琼脂板的相应孔内。

(3) 电泳:把加好样品的琼脂板放在电泳槽内,板的两端用滤纸搭桥,与缓

冲液相连,槽内

装的巴比妥缓冲液浓度可比琼脂板中的高一倍或相同。电泳时,抗原端接负极(-),抗体端

接正极(+)。

电泳时,通常以板的宽度计算电流,以板的长度计算电压。可用5~6V/cm的电压,2~4mA/

cm电流,实际工作中,可根据具体条件灵活掌握,一般泳动时间为30~60min后,即可观察

结果,若沉淀线出现的不清晰,则可置于37℃温箱或室温(25℃)下再放数小时,效果会更

好些。

3 结果通常于通电30~60min后,即可于两孔之间出现沉淀线。如抗原量少,沉淀线不

清晰,可把琼脂板放在湿盒中,置37℃保温数小时,沉淀线的清晰度有时可得以加强。

4 注意事项

(1) 对流免疫电泳是根据抗体球蛋白在pH值86的琼脂凝胶中只带少量负电荷,在电泳过程

不能抵抗电渗作用,因而向阴极倒退;而一般抗原多数不是免疫球蛋白,它们带负电荷多,

电泳过程中抵抗电渗作用后,仍向阳极移动,因此,二者在两孔间相遇处生成沉淀线的原

理设计而成的一种免疫电泳。如果抗原抗体都是免疫球蛋白,或者它们的电泳迁移率非常

接近,电泳时都向一个方向泳动,就不能作对流免疫电泳检查。

(2) 进行对流免疫电泳时,对所用琼脂质量应严格掌握。试验结果表明,电渗过大的西德进

口琼脂不适于作对流电泳用,而日本进口琼脂及处理后的国产琼脂,其性能均较好。琼脂浓

度要适当,浓度太高,可影响抗原抗体扩散速度;浓度低时,虽然抗原抗体扩散快些,但不

易打孔和取出琼脂块,故以1%~12%的浓度较合适。

(3) 抗原抗体比例适当,容易出现沉淀线,反之不易发生。

(4) 电压与电流低时,电泳时间需要长;电压和电流加大时,电泳时间可缩短。但电压过高

则能使孔径变形,甚至琼脂溶化。


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