IL-21调节自身反应性CD8 T细胞中的SOCS1表达，但在非肥胖糖尿病小鼠的胰岛中获得CTL活性不是必需的

1型糖尿病患者活化自身反应性CD8的成熟+T细胞对全副武装的效应细胞细胞毒性T淋巴细胞(CTL)发生在胰岛内。目前，成熟过程所需的信号定义很差。细胞因子可能提供必要的“第三信号”，以产生完全成熟的CTL，能够杀死产生胰岛素的β-细胞。为了确定胰岛内的自身反应性CTL是否对细胞因子产生反应，我们通过细胞因子信号的报告，生成了非肥胖的糖尿病(NOD)小鼠。这些小鼠在细胞因子信号抑制因子(SoCs)1的内源性调节元件的控制下，表达一种报告基因hCD4，该基因本身受促炎细胞因子的调节。在NOD小鼠中，hd4报告在浸润的胰岛中表达，其表达水平与浸润CD 45的频率呈正相关。+细胞。转β细胞特异性CD8诱导SOCS 1报告表达+8.3T细胞从胰腺引流淋巴结迁移到胰岛。为了确定哪些细胞因子能诱导胰岛SOCS 1启动子活性，我们检测了在没有细胞因子受体IFNAR 1或IL-21R的情况下，hCD4报告表达和CTL成熟。我们发现，在8.3TCR转基因小鼠中，IFNAR 1缺乏并不能对糖尿病产生保护作用，也不需要IFNAR 1信号在胰岛中表达上调或CTL成熟。相反，IL-21R缺陷8.3小鼠降低了糖尿病发病率，降低了胰岛CTL中SOCS 1的报告活性。而IL-21R缺乏对胰岛CD8无明显影响。+T细胞增殖或颗粒酶B或干扰素γ的表达。这些数据表明，CD8是自反应性的。+NOD小鼠胰岛中的T细胞对IL-21而不是I型IFN有反应，但胰岛固有CTL的成熟不需要IFNAR 1和IL-21R。

1型糖尿病(T1D)是一种器官特异性自身免疫性疾病，由胰岛中产生β细胞的胰岛素被破坏所致。CD8+T细胞是非肥胖糖尿病(NOD)小鼠和人类β细胞破坏的主要介质。1,2...在T1D中，自身反应性CD8+T细胞在胰腺引流淋巴结(PLN)中被激活，然后通过循环迁移到胰岛。活化的自身反应性CD8的成熟+胰岛内存在全副武装效应T淋巴细胞(CTL)。3细胞毒机制包括颗粒酶B、干扰素γ和CD107a的表达增加，CTL功能增强。而β-细胞的抗原提呈是促进CD8的必要条件。+胰岛内T细胞增殖与积累4,5，ctl效应功能的成熟与β-细胞抗原提呈无关。3...这些胰岛内禀增殖和分化事件被称为“夹层反应”。5...在这种情况下，胰岛内产生的细胞因子提供增殖信号，它们也可能提供一个“第三信号”，以产生完全成熟和功能强大的ctl，能够杀死β-细胞。6,7.

细胞因子是CD8的重要调节因子。+T细胞活化、分化与存活8,9,10...先前发表的研究表明，I型IFNs和/或IL-21可能提供胰岛内禀成熟信号。I型IFNs参与T1D的发病机制11,12,13,14已经被证明对小鼠和人的ctl成熟有影响。11,15...IL-21和IL-21R在NOD小鼠自身免疫性糖尿病发生中的作用16,17,18,19...值得注意的是，I型IFNs或IL-21在胰腺β-细胞中的转基因表达导致自身免疫性糖尿病的发生。18,20表明两者都可能在胰岛中扮演重要的角色。在慢性抗原暴露的情况下，如慢性病毒感染或自身免疫，IL-21是T细胞的重要生长因子。21,22...IL-21诱导CD8转录因子的表达+CTL成熟包括T-bet和BATF 323,24.

Ⅰ型IFNs和IL-21都是通过JAK-stat通路发出的信号。JAK-STAT通路是通过多种细胞因子激活的，在效应细胞和记忆CD8的分化和存活中起着重要的作用。+T细胞25,26...STAT 1在CD8中激活+T细胞在细胞因子(包括Ⅰ型和Ⅱ型干扰素)的刺激下，调节调控克隆扩张和效应分化的转录反应。27,28...此外，STAT 1的激活还可诱导细胞因子信号(Socs 1)等抑制蛋白的表达，SOCS 1是JAK-STAT信号的负调节因子。29,30...这些途径是小鼠自身免疫性糖尿病发展的重要调节因子。STAT 1基因缺失的NOD小鼠完全不受糖尿病的影响，用JAK抑制剂治疗NOD小鼠可预防自身免疫性糖尿病的发生。31,32.

目前，胰岛内源性CTL成熟的机制和任何潜在的细胞因子“第三信号”的同源性仍不清楚。为了解决这个问题，我们产生了一种新的nodsocs 1报告小鼠，报告了促炎细胞因子信号。33并测定了SOCS 1激活细胞因子对胰岛CD8的影响。+CTL分化过程

小鼠

NOD/LT，NOD8.3，NOD/IFNAR 134和NOD/IL-21R35已经被描述过了。SOCS 1/hCD4报告小鼠的SOCS 1/hCD4报告小鼠立即产生SOCS 1 3‘的修饰hCD4基因LOX内源SOCS 1位点中的基因33...这些小鼠经10代回交至NOD遗传背景，维持为杂合子NOD.SOCS 1。LOX/+CRE+...应用基因组学中心(多伦多，加拿大)对第10代小鼠中密度连锁板进行基因组DNA处理，其中含有1，449个单核苷酸多态性(SNP)位点。杰克逊实验室老鼠基因组信息学(MGI)和国家生物技术信息中心(NCBI)数据库被用来识别菌株差异。周围的同胚间隔。Socs 1回交小鼠的基因介于Chr 16：5，029，200(rs 4152838；GRCm 38/MM 10)和Chr 16：51，637，127(Rs 4187143)之间。所有的小鼠都是在特定的无病原体条件下在圣文森特医院生物资源中心饲养和安置在微隔离笼中的。所有的动物护理和实验都得到了圣文森特动物伦理委员会的批准。所有动物研究都是按照动物伦理机构委员会的指导方针进行的，实验是按照批准的准则进行的。

免疫组织化学

5μm冷冻切片从3个水平(间隔200μ)制备，丙酮固定，用豚鼠抗胰岛素染色，然后用辣根过氧化物酶结合抗豚鼠Ig(dako细胞分裂，Carpenteria，CA)。36...连续切片用生物素化抗hCD4和抗mCD8(均为BD生物科学)染色，然后与Vecttain Elite ABC试剂孵育。用Sigma快速3，3‘-二氨基联苯胺过氧化物酶底物显色，然后用血毒素进行染色。照片是用莱卡显微镜拍摄的，该显微镜配有莱卡相机，放大倍数为200倍。

抗体

流式细胞仪检测的抗体为：CD8(53~6.7，Biolegend)，IFNγ(XMG 1.2，eBioscience)，颗粒酶B(16G6，eBioscience)，除抗人CD4(RPA-T4，Biolegend)外。

糖尿病分析

通过测定糖尿病小鼠的尿葡萄糖水平(拜耳诊断法)来监测糖尿病的发生。怀疑患有高血糖的小鼠在连续两天进一步测试，三次试验阳性的被认为是糖尿病。血糖水平(≥15 mmol/L)采用优势II葡萄糖试纸条(ROCHE)确认。

CFSE标记、细胞转移和胰岛分离

CD8+用cfse标记NOD8.3小鼠T细胞。37...细胞在2.5×10时再悬浮7每毫升/毫升，静脉滴注2 0 0μl。进入受体小鼠的尾静脉。5天后处死小鼠，取腹股沟淋巴结(ILN)、胰腺淋巴结(PLN)和胰岛。如前所述，分离了小鼠胰岛。38.

再刺激培养与流式细胞术

用单细胞悬液法制备受体小鼠淋巴结。用0.1mg/ml牛胰蛋白酶(CalBiochem)和2mm EDTA分散于单细胞内，37°C和温热灌注5 min。在含有青霉素/链霉素、2mm谷氨酰胺、非必需氨基酸50M巯基乙醇和10%胎小牛血清的RPMI 1640培养基中洗涤分散的胰岛，在5%CO中37°C下恢复1~2h。2...对细胞进行γ表达分析。离体与iGRP206-214肽(VYLKTNVFL，Auspep)6小时。细胞表面染色取细胞，再悬浮于含0.5%BSA的PBS中，用标准程序染色。细胞内染色采用Cytofix/Cytoperm Plus试剂盒(BD生物科学，圣何塞，CA)。使用BD Fortessa流式细胞仪(BD生物科学)收集数据，然后用Flowjo软件(8.7.3版)进行分析。

51铬释放试验

CFSE标记CD8+8.3T细胞从小鼠胰腺淋巴结和胰岛中分离，并于过继转移后5天与CD 45分离。+CD8+CFSE稀释细胞用FACS ARIA(BD生物科学)进行分类。51铬释放试验按先前所述进行。39...P 815肥大细胞瘤细胞负载200μmol/L的Ci[51铬酸钠(美国药理学生物技术)与γ-γ-吡咯烷酮(IGRP)206-214肽。用分类CD8孵育靶细胞P 815+T细胞以5：1效应物/靶细胞之比，在37°C培养基中三式一式16小时，或加入2%TritonX-100细胞于一组靶细胞中，分别测定细胞自发和全细胞溶解情况。在γ计数器(Perkin-Elmer)上测量收集的上清液的放射性.专一51Cr释放量的计算为：溶解百分比=(测试cpm，−自发cpm)/(总cpm-自发cpm)×10 0。

统计分析

数据为平均值±扫描电镜。采用单因素方差分析和SIDAK后测进行多重比较和学生T检验，以确定统计学意义。用对数秩(Mantel&Cox)检验分析糖尿病的发病率.P<0.001.0 5(*)，p<0.0 1(**)，p<0.001.0 1(*)。用GraphPad棱镜5.0软件进行分析。

胰岛细胞因子信号报道的研制

我们以前在C57BL/6的背景下生成小鼠，报告SOCS 1启动子的活性。33...这些老鼠Socs 1用一种修饰的基因替换基因Socs 1氧氟沙星位点(SOCS 1)侧翼的基因(SOCS 1)LOX)和一个3‘报告基因。报告人CD4(HCD4)含有F43I突变和细胞内截短功能。40...当SOCS 1LOX细胞表面hCD4代替SOCS 1表达，是SOCS 1启动子活性的报告者。SOCS 1LOX用cmv-cre小鼠在早期胚胎发生过程中表达cre，使小鼠体内所有细胞均出现socs 1缺失。41...SOCS 1LOX/+.Cre+然后将小鼠回交到NOD遗传背景，并维持为SOCS 1。LOX/+杂合子(称为NOD.SOCS 1/hCD4)，导致健康小鼠免于任何通常与纯合子SOCS 1缺失相关的疾病42.

NOD小鼠胰岛SOCS 1报告活性的研究

应用免疫组织化学和流式细胞术检测NOD.SOCS 1/hCD4小鼠胰岛中SOCS 1报告活性。无滑膜炎的幼鼠胰岛中未见hCD4表达(图一)。1A)。在滑膜炎小鼠中，胰岛素可观察到hCD4的表达。+β-靠近免疫细胞的细胞，以及免疫细胞本身(如图所示)。1A)。更多的细胞是hd4。+胰岛内有更多的滑膜炎。用流式细胞术检测NOD.SOCS 1/hCD4小鼠胰岛中hCD4的表达。β-细胞表达hCD4的比例随年龄增加而增加，与CD 45的表达率呈正相关。+胰岛内的免疫细胞。1B-D)。这些数据表明，NOD小鼠胰岛中存在诱导SOCS 1表达的细胞因子，SOCS 1报告活性随着胰岛炎的增加而增加。

SOCS 1在NOD小鼠胰岛中的表达。(A)取50、70和100日龄雌性NOD.SOCS 1/hCD4小鼠胰腺切片，用胰岛素、人CD4(HCD4)和小鼠CD8抗体染色。图中显示了3只鼠/龄的代表性切片。放大率200倍(B–D)从雌性NOD.SOCS 1/hCD4小鼠或野生型白蚁中分离出50~70日龄和90~120日龄的胰岛。CD 45的比例+细胞和hCD4+流式细胞仪检测胰岛细胞。(B)CD 45中hCD4染色的代表直方图−野生型胰岛细胞(WT)和NOD.SOCS 1/hCD4小鼠50日龄和100日龄。(C)汇总数据显示%CD 45的平均值±SEM−hCD4+小鼠胰岛细胞(n=5-6/组)。**p=0.0056，*p=0.016，单因素方差分析与西达克后测进行多重比较。(D)%CD 45的相关性−hCD4+CD 45%细胞+NOD.SOCS 1/hCD4小鼠胰岛细胞。r2=0.763，p=0.0004，线性回归分析。

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在胰岛中获得CTL效应函数

我们以前已经证明了胰岛固有的CD8的存在。+NOD小鼠CTL分化机制的研究3...本研究采用流式细胞术检测IFNγ、颗粒酶B和CD107a表达等细胞毒性标记物对CTL成熟的影响。以确认这与骨气增加CTL的活性离体CTL检测。NOD8.3T细胞经CFSE标记后转移至12~15周龄NOD受体。5天后CD8+CFSE+从胰腺引流淋巴结和胰岛中分离T细胞，应用于p815细胞的CTL检测。206-214肽。我们观察到与PLN相比，从胰岛分离的8.3个细胞的CTL活性有明显的提高(见图)。2A)，证明CD8的功能成熟。+根据我们以前的实验，CTL发生在胰岛上。3.

CD8期SOCS 1报告表达增加+结瘤胰岛CTL分化。(A在8.3脾细胞移植后5天分离胰腺淋巴结和胰岛，通过细胞分选和CTL活性定量方法分离CFSE阳性细胞。离体...数据显示，三个独立实验的平均值+扫描电镜。*p<0.01。(B在8.3/hCD4脾细胞转移后第5天分离的胰岛和胰腺淋巴结(PLN)，显示hCD4和CFSE的表达。(C)CD8上hCD4(平均荧光强度，MFI)的表达+CFSE+用CFSE稀释法计算细胞分裂的T细胞。数据显示，3个独立实验的6只小鼠平均±扫描电镜。**p<0.01，单因素方差分析比较1区和7区。

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胰岛内CTL对SOCS 1激活细胞因子的反应

接下来，我们试图确定细胞因子刺激是否是CD8的一个重要组成部分。+胰岛T细胞成熟。我们将NOD8.3TCR转基因小鼠转化为NOD.SOCS 1/hCD4报告小鼠，在SOCS 1激活细胞因子的刺激下，产生在细胞表面表达hCD4的NOD8.3/hCD4小鼠。CFSE标记的8.3 T细胞表达SOCS 1/hCD4报告，然后过继转入NOD小鼠。5d后，以CFSE稀释度作为SOCS 1启动子活性的指标，对各细胞分裂数进行SOCS 1/hCD4报告表达(平均荧光强度，MFI)定量。2B，补充图。1)。我们的数据显示，与内源性细胞相比，转移的细胞中hCD4的表达增加，而在胰腺淋巴结中细胞分裂没有改变。相反，在胰岛中，随着转移细胞的分裂，hCD4的表达逐渐增加。2C)，大约。1区与7区之间的表达水平增加2倍(P<0.01)。这些数据表明，自身反应性CD8+8.3T细胞在NOD小鼠胰岛中上调SOCS 1报告，提示其对胰岛环境中的促炎细胞因子有反应。

I型IFNs和IL-21对T细胞SOCS 1表达的调节43,44两者均对NOD小鼠1型糖尿病的发生有调节作用。因此，我们接下来要测试的是，I型IFNs或IL-21是否是观察到的scs 1在胰岛CD8中诱导的中介物。+T细胞和/或是CTL分化和糖尿病发展所必需的。

CD8+胰岛内CTL分化不需要IFNAR 1

I型IFNs最近被证明能诱导CTL效应功能。离体在人CTL中识别胰岛抗原iGRP15...此外，IFNAR 1-缺乏CD8+T细胞在病毒模型中的扩张和效应CTL分化受损45...进一步，I型IFNs激活T细胞中SOCS 1的表达46...因此，我们测试了CD8是否需要Ⅰ型IFNs。+胰岛CTL分化。我们将NOD 8.3小鼠与NOD 1/IFNAR 1基因敲除小鼠杂交，产生缺乏IFNAR 1的NOD 8.3小鼠(NOD 8.3/IFNAR 1)。雌性NOD8.3/IFNAR 1小鼠自身免疫性糖尿病的发生率与野生型NOD8.3小鼠无明显区别(图1)。3A).

在8.3CD8中，SOCS 1上调或CTL分化不需要IFNAR 1。+NOD胰岛T细胞。(A)糖尿病发病率8.3/IFNAR 1和8.3对照组(n=15~20只/组)。(B在8.3/hCD4或8.3/IFNAR 1/hCD4脾细胞转移后第5天分离的典型胰岛显示hCD4和CFSE的表达。(C)CD8细胞中hCD4(MFI)的表达+CFSE+用CFSE稀释谱计算每个细胞分裂的T细胞。数据显示，3个独立实验的7~8只小鼠平均±扫描电镜。1区MFI与7区MFI之间的差异(p=0.03)和IFNAR 1(p=0.0003)细胞的差异，单因素方差分析与SIDAK‘s后测进行多重比较。(D在8.3或8.3/IFNAR 1脾细胞转移后5天，胰腺淋巴结和胰岛分离，颗粒酶B表达和CFSE稀释。(E)CD8平均颗粒酶B表达(MFI)+胰腺淋巴结和胰岛T细胞。数据显示，3个独立实验的4~5只小鼠平均±扫描电镜。8.3与8.3/IFNAR 1差异无统计学意义。

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然后，我们将NOD8.3/hCD4小鼠与NOD/IFNAR 1小鼠杂交，产生SOCS 1/hCD4报告小鼠，而IFNAR 1缺乏IFNAR 1(NOD8.3/IFNAR 1/hCD4)。将NOD8.3/hCD4或NOD8.3/IFNAR 1/hCD4小鼠的CFSE标记T细胞过继转移至12~15周龄NOD小鼠，于移植后第5天进行分析。3B)。根据我们先前发表的分析，在转移后的IFNAR 1缺陷8.3细胞中没有明显的增殖缺陷(数据未显示)。34...SOCS 1/hCD4报告在移植的8.3 T细胞中的表达不受PLN或胰岛中IFNAR 1缺失的影响(图1)。3C)。同样，颗粒酶B在胰岛CD8中也有上调作用。+T细胞不受IFNAR 1缺乏的影响(图1)。3D，E表明I型IFNs不太可能在NOD小鼠胰岛固有CTL分化中发挥非冗余作用。

CD8+胰岛内CTL对IL-21有反应

IL-21及其受体IL-21R在NOD小鼠自身免疫性糖尿病的发展中起着关键作用，一些研究表明，这部分是由于其对CD8的影响。+T细胞19,23,35,47...IL-21还能激活scs 1在CD8中的表达。+T细胞48...检测胰岛CD8是否需要IL-21R+T细胞功能：NOD8.3小鼠经NOD 8.3基因敲除，产生缺乏IL-21R的NOD.8.3小鼠(NOD8.3/IL-21R)。雌性NOD8.3/IL21R小鼠糖尿病的发生率明显低于野生型NOD8.3小鼠(图1)。4A)，根据先前观察到的对IL-21或IL-21R缺陷NOD小鼠的保护作用。16,17,18,19...然后，我们将NOD8.3/hCD4小鼠与NOD 3/IL-21R小鼠杂交，生成NOD8.3/IL-21R/hCD4，以确定IL-21R信号是否是CTL分化所必需的。体内...将NOD8.3/hCD4或NOD8.3/IL-21R/hCD4小鼠的CFSE标记T细胞移植入12~15周龄NOD小鼠，5天后进行分析。4B)。在缺乏IL-21R的胰岛浸润性CTL中，SOCS 1/hCD4报告表达降低，提示胰岛CD8表达降低。+CTLs在IL-21作用下上调SOCS 1(图1)。4C)。而转染的NOD8.3/IL-21R T细胞的增殖不受IL-21R丢失的影响。4D+E)。此外，转移的NOD8.3/IL-21R T细胞在胰腺淋巴结或胰岛中的IL-21R信号的缺失不会影响颗粒酶B的表达和干扰素γ的产生(图一)。4F-I)。这些数据表明，胰岛CTL对IL-21有反应，转移后SOCS 1/hCD4报告子表达上调，而胰岛CD8上则有IL-21R的表达。+T细胞不是CTL增殖或分化所必需的，这是由颗粒酶B和干扰素γ表达上调所决定的。

在8.3CD8中，最大的SOCS 1上调需要IL-21R，而不是CTL分化。+NOD胰岛T细胞。(A8.3/IL-21R组和8.3例对照组糖尿病发生率(n=15~19只/组，P<0.05)。(B在8.3/IL-21R/hCD4脾细胞转移后第5天分离出的代表样块显示hCD4和CFSE的表达。(C)CD8细胞中hCD4(MFI)的表达+CFSE+用CFSE稀释谱计算每个细胞分裂的T细胞。数据显示，3个独立实验的3~8只小鼠平均±扫描电镜。基因型间的差异**p<0.001，双向方差分析。1区MFI与7区MFI的差异为野生型p=0.02，单因素方差分析与Sidak后测进行多重比较。(D典型的腹股沟淋巴结(ILN)、胰腺淋巴结(PLN)和胰岛在8.3/IL-21R脾细胞移植后5天的直方图显示CFSE稀释。(E)CD8的平均±SEM频率+12只小鼠腹股沟淋巴结、胰腺淋巴结和胰岛的T细胞分裂。基因型无统计学差异。(F在8.3/IL-21R脾细胞转移后第5天分离的胰腺淋巴结和胰岛，显示颗粒酶B表达和CFSE稀释。(G)CD8上颗粒酶B(MFI)的表达+胰腺淋巴结和胰岛T细胞。数据显示，4项独立实验的8只小鼠的平均±扫描电镜。基因型无统计学差异。(H在8.3/IL-21R脾细胞移植后5天分离胰腺淋巴结和胰岛，用iGRP再刺激6h。离体显示干扰素γ表达及CFSE稀释。(I)CD8的频率+CFSE+干扰素γ+胰腺淋巴结和胰岛细胞(%)。数据显示，3个独立实验的n=5~10只小鼠的平均±扫描电镜。基因型无统计学差异。

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我们的实验为进一步了解胰岛CD8中的细胞因子信号提供了进一步的线索。+T1D NOD模型中的T细胞。当胰岛在胰岛炎期浸润时，SOCS 1的报告表达在β细胞中增加，这与先前的研究结果一致，表明干扰素γ对浸润胰岛的β细胞有作用。36...我们的数据还表明，CTL暴露在胰岛中的IL-21中，这对胰岛CD8中SOCS 1的表达有非冗余的贡献。+CTL。然而，这些IL-21信号可用于胰岛CTL的成熟.相反，IFNAR 1完全可用于SOCS 1上调和胰岛CTL成熟事件。

最近的数据为IL-21作为T1D发病机制的关键免疫调节剂提供了一个令人信服的理由，因为IL-21和IL-21R缺陷NOD小鼠几乎完全不受糖尿病的保护，这取决于动物所处的环境。16,17,18,19...此外，IL-21阻断抗体能够逆转NOD小鼠近期的糖尿病发病。49...虽然很明显，IL-21R的丢失会影响许多免疫系，包括CD4。+和CD8+T细胞、B细胞和树突状细胞，推测CD8是合理的。+T细胞可能是IL-21作用于T1D的重要位点。IL-21促进CD8+CTL发展离体23,50白细胞介素-21R缺乏症CD8+NOD小鼠T细胞的糖尿病发生功能受损35,47...鉴于这些数据，我们假设IL-21R信号将是一个必要的胰岛固有的CTL成熟信号。8.3只IL-21R小鼠可免于自身免疫性糖尿病，但符合IL-21和IL-21R缺失NOD小鼠的表型，而IL-21R缺失8.3CD8则令人惊讶。+NOD小鼠胰岛T细胞在增殖和CTL成熟方面无明显缺陷。我们的数据表明CD8+IL-21R缺陷NOD小鼠T细胞功能障碍不太可能是CD8受损所致+T细胞启动或CTL成熟。

IL-21调节记忆CD8的形成+T细胞51,52在某些病毒模型中，它们在回忆反应中的最佳功能是必需的。53,54,55提示CD8中缺乏IL-21R+T细胞可能损害胰岛抗原特异性CD8的形成或功能。+NOD小鼠T细胞记忆池。此外，IL-21对预防CD8也很重要。+慢性病毒感染的T细胞衰竭24,56,57,58表明它在T1D中可能有类似的影响。所以CD8+IL-21R缺陷NOD小鼠在CD8初始过程中可能出现明显的内在缺陷。+T细胞启动和CTL成熟。

I型IFNs被认为是CTL成熟的重要信号之一，主要与病毒感染有关。干扰素α能促进CD8细胞成熟+T细胞，如颗粒酶B、干扰素γ和FasL的上调所示15,59，以及IFNAR 1基因敲除CD8+T细胞颗粒酶B表达减弱45...此外，Ⅰ型干扰素还能促进CD8的迁移。+T细胞进入胰岛12...NOD小鼠在病程中表现出显著的IFN诱导基因信号。60抗IFNAR 1抗体对NOD小鼠自身免疫性糖尿病的保护作用13，我们的数据表明，在NOD小鼠自身免疫性糖尿病的发展中不需要IFNAR 1。34...与这些发现相一致，我们发现IFNAR 1缺陷8.3小鼠也有正常的糖尿病发病率和CD8。+从NOD胰岛转移和分离后，T细胞颗粒酶B的表达水平正常。这些数据表明，胰岛CD8不需要I型IFN。+8.3NOD小鼠CTL成熟或糖尿病发病。

本研究探讨了NOD小鼠胰岛特异性CTL成熟的机制。我们的数据表明CTL很可能受到SOCS 1激活的NOD胰岛细胞因子的影响，但这两个候选细胞因子受体IFNAR 1和IL-21R都不是CTL在胰岛中成熟所必需的。这可能意味着这一过程独立于SOCS 1的激活效应，其他细胞因子是成熟过程中更为关键的调节因子，或者在此背景下I型IFNs和IL-21在功能上是多余的。