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ICH实验指南(二)

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发表时间:2018-10-11 15:22作者:武汉新启迪Xinqidi来源:http://www.qidibio.com

方案

脱蜡/补液

在65℃的烘箱中脱蜡1小时。

使用以下一系列洗涤液去石蜡/水合物:两次二甲苯洗涤(每次5分钟),然后两次100%乙醇冲洗(每次5分钟),接着是95%乙醇,70%乙醇,50%乙醇,30%乙醇,然后在摇床上用H 2 O和TBST洗涤5分钟。

抗原检索

将载玻片浸入含有抗原修复溶液的染色皿中。

将盖好的染色盘放入电饭煲中。加入120 mL d H2O并按“煮”。

当“烹饪”变为“保温”(约20-30分钟)时,将染色皿移到工作台,让盖子冷却20分钟。

染色

在摇床上用TBST洗涤载玻片5分钟。

通过用3%过氧化氢覆盖组织10分钟来灭活内源性过氧化物酶。

用TBST洗涤载玻片三次(每次在振荡器上3分钟)。

用封闭溶液封闭载玻片1小时。

根据说明书的建议,在封闭缓冲液中稀释一抗。

将一抗应用于每个切片,并在加湿室(4 ℃)中孵育过夜。

用TBST洗涤载玻片三次(每次在振荡器上3分钟)。

根据制造商的建议,对封闭溶液中稀释的二级HRP-缀合的抗兔抗体应用于每个部分;在室温下孵育1小时。

用TBST洗涤载玻片三次(每次在振荡器上3分钟)。

将新制备的DAB底物添加到切片中。

在室温下将组织切片与底物孵育直至形成合适的染色(通常2-5分钟)。

用水冲洗切片。

与苏木精对抗。

用水冲洗切片。

使用100%乙醇(每次冲洗20次浸渍)两次冲洗使样品脱水,然后用二甲苯冲洗两次(每次冲洗30次)。

使用中性树胶封片剂在载玻片上安装盖玻片。


文章分类: 抗体技术资料
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