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WB抗体常见问题(二)

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发表时间:2018-09-26 15:03作者:武汉新启迪Xinqidi来源:http://www.qidibio.com
显色或曝光后无条带胶与膜方向反了转膜时应依次放好PDVF膜与凝胶所对应的电极,即凝胶对应负极,PDVF膜对应正极。
选用的一抗、二抗及显色方法不合适选择合适的一抗、二抗和显色方法
目的蛋白含量低于检测下限加大上样量或浓缩样品
抗体效价过低增加抗体浓度
抗体孵育时间不足延长孵育时间,37°C孵育1小时以上
抗体过度洗涤减少洗涤时间及次数
加入HRP底物反应与曝光检测之间间隔时间过长反应3到5分钟及时检测
背景过高封闭物用量不足提高封闭物浓度,孵育时保证封闭液完全浸没转印膜
封闭物使用不当检测生物素标记的蛋白时不可用脱脂奶粉封闭
封闭时间不够室温37度封闭1小时以上,4度封闭过夜
抗体非特异性结合降低抗体浓度,减少孵育时间
抗体浓度过高或洗涤不够降低抗体浓度,增加洗涤次数和时间
化学显色底物过多按说明书加入适量的显色底物
杂带多杂蛋白多处理目的蛋白
抗体特异性不强使用特异性强的抗体
抗体孵育时间过久减少抗体孵育时间
二抗与抗原有交叉反应选择合适的封闭物
底物显色与曝光时间长了缩短显色及曝光的时间
大分子量WB膜孔径太小更换孔径较大的膜
转膜电压电流低提高电压/电流
转膜时间短延长转膜时间
胶浓度太大使用低浓度的胶,充分混匀
转膜缓冲液配方不合适调整转膜缓冲液中甲醇及SDS浓度


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