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以甲型病毒复制子为基础的稳定棘抗原疫苗诱导保护性免疫,防止sars-cov-2在猫之间传播

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发表时间:2021-10-21 11:11作者:武汉新启迪Xinqidibio

摘要

在SARS-CoV-2大流行的早期,人们对新动物宿主的感染和对病毒流行病学的影响提出了关注。其他动物的感染可能会导致临床疾病,允许进一步的突变,并降低建立非人类水库的风险。猫是第一个报告的动物对自然和实验感染SARS-CoV-2易感.考虑到这些发现引起的关注,以及人类和猫之间的密切接触,我们的目标是开发一种疫苗候选,以减少SARS-CoV-2的感染,并防止猫之间的传播。在此,我们报告了一种以委内瑞拉马脑炎病毒为基础的复制粒子(RP)疫苗,该疫苗在各种动物中都是安全有效的,可以在豚鼠和猫体内诱导中和抗体反应。SARS-CoV-2尖峰免疫原的设计是建立强中和抗体反应的关键.猫接种疫苗可诱导较高的中和抗体反应,对SARS-CoV-2B.1.1.7变异株也有效。有趣的是,与对照动物相比,在SARS-CoV-2攻击后,免疫猫的口咽或鼻拭中无法检测到感染病毒。相应地,受挑战的控制猫将病毒传播给接触过的猫,而接种疫苗的猫没有传播病毒。结果表明,RP疫苗能诱导保护性免疫,预防SARS-CoV-2的感染和传播.这些数据表明,如果需要这种方法,这种RP疫苗可能是一种多物种疫苗,有助于预防感染和动物之间的传播。

导言

SARS-CoV-2是一种传染性极强的呼吸道冠状病毒,于2019年末在中国出现,此后在全球范围内蔓延,导致持续不断的冠状病毒病2019(新冠肺炎)大流行。冠状病毒是包膜的、单链的、非分段的、阳性的RNA病毒,编码16种非结构蛋白和4种结构蛋白.结构尖峰蛋白(S)与血管紧张素转换酶2(ACE 2)结合,是决定宿主细胞向性的主要决定因素。ACE 2是一种I型整体膜蛋白,在人体血管健康中起着重要的作用。利用ACE 2受体进入上呼吸道(URT)细胞,SARS-CoV-2感染在临床上表现出广泛的结果,从无症状到非常严重的呼吸道感染,在某些情况下由于免疫功能障碍而变得复杂,导致新冠肺炎的死亡人数超过3400万人。由于与人类ACE 2受体高度相似的ACE 2同源物也存在于许多其他动物的细胞上,因此了解这些潜在宿主是否能在疾病传播中发挥任何作用是很重要的。自从第一次人类感染以来,已经证明猫、狗、雪貂、仓鼠和水貂在实验室研究中或通过自然传播很容易被感染。1,2,3,4,5。这些易感动物在人类流行病学中所起的作用尚不清楚,尽管水貂和人类之间的双向传播已经被证明导致了丹麦和荷兰水貂养殖场的所有动物被宰杀。3。因此,最重要的是了解动物在这种病毒传播中的作用,特别是它们作为病毒宿主的潜力,以及开发重要的病毒变异体从而影响整体流行病学的潜力。

猫在新冠肺炎流行病学中的重要性还没有完全确定,尽管有大量的报告显示猫检测出SARS-CoV-2阳性,大部分与同一家庭的人类感染有关。第一份公开发表的报告证明猫可以被实验感染,这也显示了病毒传染给了接触过的猫。1。虽然感染的猫并没有表现出明显的临床疾病,但死后发现了明显的呼吸道损害,尤其是在年轻的猫身上。在随后的实验试验中,没有在被挑战的猫身上观察到任何临床疾病,但病毒的长期脱落和传播到接触猫的情况再次被发现。45。除了这些实验性感染研究外,也有大量报告称家猫测试sars-cov-2呈阳性,只有不到四分之一的猫出现了疾病的迹象,也没有人类报告的严重症状。6。虽然这些个案中有多宗与证实感染sars-cov-2的人有关,但情况并非总是如此。7,家庭猫之间的自然感染还没有被排除。中国猫的血清学调查7美国8法国9、意大利10已经证明有很高比例的猫被测试为SARS-CoV-2阳性,包括野生动物没有已知的所有权史。虽然对猫感染的担忧已大大减少,但最初有报道称,有大量猫被主人遗弃。11导致一些重要的舆论领袖发表关于人类感染猫的低风险的声明。6。此外,检测出sars-cov-2阳性的主人被建议远离他们的猫以防止传播,而sars-cov-2对猫的感染现在可报告给世界动物卫生组织(从历史上讲,国际兽疫局)。12。最近,随着新变种的兴起,也有报道说这些变体可能改变了宿主的取向。13也可能是不同的病机14。因此,进一步研究SARS-CoV-2在猫体内的流行病学,以及猫种群是否有可能成为该病毒的天然宿主,具有重要的意义。

目前正在研制大量抗SARS-CoV-2的人类疫苗,经紧急使用许可(EUA)批准在全球不同地区使用的疫苗超过10种。疫苗类型包括佐剂表达的sars-cov-2 S蛋白,佐剂化的sars-cov-2病毒疫苗,编码sars-cov-2 S的mrna,以及表达sars-cov-2 S的重组病毒载体疫苗。15。早期报告表明,这些疫苗具有良好的安全性,并大大减少了感染的数量和严重程度。这些疫苗长期成功的其他重要考虑因素包括诱导保护的免疫相关性、诱导适当免疫持续时间所需的疫苗接种方案、对变异株的保护、全球人口所需的这些疫苗的成本和生产规模以及储存和运输温度、疫苗引起的血小板减少症等潜在的罕见副作用。16以及是否检测到任何抗体依赖的增强,就像在其他冠状病毒疫苗候选疫苗中很少见过的情况一样。17。已广泛应用于兽医行业的冠状病毒疫苗有传染性支气管炎病毒(IBV)、牛冠状病毒(BCV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猫传染性腹膜炎(FIP)和犬冠状病毒(CCV)。IBV与SARS-CoV-2感染类似,IBV是通过呼吸道传播的,最初在鸡体内引起上呼吸道感染,然后是系统性疾病,这取决于病毒的种类,可能涉及肾脏、生殖器官或肠道。IBV已演变成全球范围内数量庞大的变异型毒株,值得注意的是,有许多不同的IBV血清型存在。18。这些血清型具有足够的抗原特异性,大多数需要独特的血清型特异性疫苗来控制这种疾病。

IBV疫苗的许可不仅需要临床疾病的保护,而且需要高度减少病毒在气管中的复制。鉴于其传播的呼吸途径和大幅度减少呼吸道病毒存在的要求,最有效的疫苗是减毒活疫苗,这种病毒是通过黏膜喷洒或在饮用水中传播的。局部注射减毒IBV疫苗除了引起全身IgA和IgG抗体应答外,还可引起相对较短的局部黏膜IgA中和抗体应答。19,20,21。然而,其完整的保护机制尚不清楚,而且很可能涉及细胞介导的免疫,在寿命较长的鸟类中,除S外,其他蛋白的特异性免疫也可能被佐剂灭活的全病毒疫苗的肠外注射促进,这大大延长了免疫的持续时间,并有可能促进由粘液注射疫苗启动的免疫应答。有趣的是,通过肠外免疫途径诱导出抗S蛋白的病毒中和血清学抗体,对呼吸道IBV的挑战提供了较低水平的保护。22,23,24。因此,除了预防临床疾病外,确定人的SARS-CoV-2疫苗的候选疫苗(其中大多数用于肠外注射)是否能够控制上呼吸道感染和病毒传播的情况尤其令人感兴趣。初步迹象表明,这些疫苗正在成功地减少人与人之间的传播,但所涉及的机制尚需进一步研究。

在猫科动物的对照实验中,已经证明sars-cov-2病毒很容易感染猫,虽然在大多数情况下没有或只有轻微的疾病被发现,但是猫可以长时间地摆脱病毒,感染其他的猫。4。预防或限制受感染猫体内的病毒复制,从而减少猫体内的直接接触传播,将有助于防止猫种群中建立病毒库,并有可能限制这些物种中病毒突变体的发育或选择。为了预防猫与猫之间的传播,我们试验了一种疫苗是否能保护猫免受SARS-CoV-2的攻击,并在受控条件下防止病毒在猫之间传播。

为此,我们利用委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)TC-83弱毒株的α-病毒复制子技术,表达了SARS-CoV-2 S蛋白。

其他几种基于甲型病毒复制的疫苗已经被设计出来,比如rprna-cov2S。25,月球-COV 1926,以及基于甲型病毒的dna启动自复制(Drep)。27,均以SARS-CoV-2野生型尖峰蛋白为基础,表现出良好的抗体应答和T细胞活化。此外,复制子技术已经在许多物种(包括人类)中进行了测试。28,29基于VEEV的复制子在猫身上被证明是安全的,可以减少Feline Calicivirus的临床效果和脱落,这会引起急性呼吸道感染(作者未发表的观察结果)。此外,在鸡、狗、马、猪和牛身上检测到了各种抗原靶点的良好反应。28。该复制子构成了Sequity RNA粒子疫苗平台的基础,该平台目前在美国被授权用于多种猪的应用。在此系统中,插入感兴趣的外源基因SARS-CoV-2S,以代替VEEV结构基因,产生能够在导入细胞后表达感兴趣基因的自扩增RNA。自扩增复制子rna引导大量蛋白在转染细胞中的翻译,达到细胞总蛋白的15-20%。30。由于复制子RNA不包含任何VEEV结构基因,因此RNA是传播缺陷的。通过提供VEEV结构基因,复制子RNA可以被包装成复制子粒子(Rp)。反式以启动子无衣壳和糖蛋白辅助RNA的形式,当辅助和复制子rna结合并共转染细胞时,复制子rna被有效地包装成单周期繁殖缺陷rp,用于疫苗的制备。31。Rp疫苗已被证明能诱导先天和适应性免疫反应,包括病毒中和抗体和T细胞反应。28。具有重要意义的是,这一系统可以非常迅速地使用,有足够的材料在几周内部署疫苗。

Sars-cov-2 S蛋白的结构构象和细胞定位对诱导保护性免疫应答具有重要意义。32,33,34。因此,我们在野生型变异的同时,生成并测试了五种S抗原,这些抗原含有多种类型的突变,目的是稳定亚稳S蛋白的预融合构象,并增加其细胞表面定位。这些S抗原用于体外蛋白表达研究,并用于制备VEEV-RP疫苗,检测其在豚鼠体内的免疫原性。我们进一步研究了两种产生野生型S抗原(SpikeWt)或优化S抗原(SpikeOPT)的候选抗原,它们包含了大多数稳定突变。我们比较了两种抗原--通过质粒DNA启动的复制子RNA(DREP)载体疫苗或基于RP的疫苗--在诱导体液和细胞免疫反应方面的效果。选用SPIKOPT RP疫苗,并在猫免疫挑战试验中评价其抗SARS-CoV-2感染和/或防止传染给接触非接种猫的能力。

结果

SARS-CoV-2钉抗原设计

最近的sars-cov-2疫苗研究表明,稳定S蛋白的预融合形式可以增强mrna和载体疫苗中抗原的免疫原性。33,35。因此,我们设计了五种sars-cov-2-S抗原形式,并结合可能增强其稳定性或细胞表面表达的突变,包括呋喃裂解位点(Fcs)的失活。穆特)、双脯氨酸稳定突变(2P)、C末端结构域(∆ctd)缺失和/或用水泡性口炎病毒G蛋白的对应物替换CTD和跨膜区(TM)。1).

图1:SARS-CoV-2S抗原设计示意图.
figure1

对野生型信号肽(SP)、S1和S2亚基、呋喃裂解位点(FCS)、跨膜区(TM)和胞浆尾区(CTD)的位置进行了研究。构造包含各种更改,包括fcs突变(Fcs)。穆特R:r682A/R683A),脯氨酸稳定突变(2P:K)986P/V987P),缺失CTD,用水泡性口炎病毒G蛋白(VSV)替代TM/CTD。

改良SPIKE抗原的体外分析及在豚鼠体内的免疫原性研究

免疫荧光法检测pCAGGS 2质粒所产生的6个S变异体在转染细胞上的表面表达。2A)并用流式细胞仪进行定量。2B)。包括VSV-G的TM/CTD在内的S型细胞表面有较高的表达趋势,特别是结合稳定的2P突变(Spike FCS)。穆特-VSV和SPICK FCS穆特-VSV)。

图2:SARS-CoV-2S变异体在免疫豚鼠体内的体外表达及体液免疫应答。

A免疫荧光显微镜观察HeLa细胞表面抗原表达水平及定位。细胞核用Hoechst(蓝色)和S蛋白染色,用抗RBD抗体(绿色)染色。B用流式细胞仪检测转染后24h平均荧光强度(MFI),定量检测转染HEK293T细胞表面抗原表达水平。棘蛋白的免疫染色与(A). C以SARS-CoV-2S-RBD(固体颜色)或S外显子(模式)为捕捉抗原,于接种/增强后第56d,用ELISA法检测接种VEEV的豚鼠血清中SARS-CoV-2-S抗体水平。所示为半数最大有效浓度(EC)。50)研究结束时采集的血清值(以倍稀释法表示)。D在Vero E6细胞上检测抗sars-cov-2 S假型vsv的中和抗体效价,并以半数抑制浓度(IC)的形式表达。50,血清稀释倍数)。ESARS-CoV-2代理病毒中和试验用10.000倍稀释的豚鼠血清样品测定抗体介导的S-ACE 2受体相互作用。

为了评估S变异体的免疫原性,我们采用基于VEEV复制子粒子(RP)系统的疫苗免疫豚鼠。实验第0、21、42天经肌肉注射1×107 VEEV RPS免疫动物,第56天取血清进行分析。与野生S型抗原相比,FCS(FCS的其他5个S变异体)失活。穆特)导致抗受体结合区(RBD)或S外显子区(SED)的ELISA抗体滴度显著增加(如图所示)。2C)。S蛋白中引入的额外突变并没有进一步显著提高免疫原性。中和抗体滴度--用商用SARS-CoV-2代病毒中和试验或假病毒中和试验--证实了ELISA结果(图1)。2D,E)。相对于野生型-S抗原,VEEV rp疫苗免疫动物血清中和滴度呈上升趋势,产生含有变异FCS的S抗原,将TM/CTD替换为VSV-G,结合2P稳定突变(Spike FCS)。穆特-2P-VSV)。根据细胞表面和免疫原性数据,我们选择这种SARS-CoV-2S型作为先导疫苗抗原,并将其进一步称为SPIKOPT。

VEEV DREP和VEEV RP疫苗候选株在豚鼠体内的免疫原性研究

用质粒DNA启动的复制子RNA(DREP)载体疫苗或VEEV RP载体疫苗,在豚鼠模型中,肌肉注射后,检测SPIKWt和SpikeOPT抗原的免疫原性。3A)。免疫后,所有动物的血清转化率均以RBD和S外显子域(SED)间接酶联免疫吸附试验(SED)评估.与VEEV-RP疫苗相比,DREP疫苗的免疫效果较差。3B、C)。与先前的豚鼠研究相一致,野生型S诱导的抗体滴度低于SpikeOPT抗原。

图3:豚鼠模型中候选疫苗的免疫原性。
figure3

A动物手的时间线。V=接种质粒DNA启动的复制子RNA(DREP)或VEEV复制子粒子(RP),B=采血。B, C间接ELISA采用SARS-CoV-2-S RBD(左)或S外显子(右)作为捕获抗原.如图所示50野生型S抗原(SpikeWt)或优化S抗原(SpikeOPT)暴露豚鼠血清(以倍稀释法表示)的价值。DSARS-CoV-2代位病毒中和(VN)试验采用1.000倍稀释血清标本,于第34天进行初次增强接种,并以抑制百分比的形式表达。E第70/71天采血淋巴细胞刺激试验(LST)结果。用纯化的SARS-CoV-2S1抗原刺激离体淋巴细胞,96h后检测细胞增殖。浇口-补充图中的程序。1.

用SARS-CoV-2代生病毒中和试验(VN)测定免疫动物血清中和抗体滴度.显然,在这两种疫苗平台中,与SpikeWt抗原相比,SpikeOPT抗原诱导出更高的代理VN滴度(图1)。三维空间)。VEEV rp载体平台以高效诱导体液和细胞反应而闻名。28。为评价VEEV RPS或DREP疫苗候选疫苗诱导的细胞反应水平,进行第三次免疫,7天后分离淋巴细胞进行淋巴细胞刺激试验(LST)。与两种疫苗平台在体液反应上的差异不同,DREP免疫在高浓度(5.0g/ml)的SARS-CoV-2S1抗原刺激下,与VEEVRPS相比,可产生类似的T细胞活化(图一)。3E)。有趣的是,在低浓度SARS-CoV-2S1抗原(0.16g/ml)下,DREP免疫动物的反应性T细胞水平似乎高于VEEV-RP免疫动物。用低浓度的SARS-CoV-2 S1抗原刺激后,SHR-CoV-2S1抗原的特异性T细胞分化水平略有升高,但在刺激5g S1(黄条)时,这种差异不再明显。

实验结束时取气管拭子,以确定体液免疫反应是否也能产生黏膜免疫。有趣的是,在气管拭子中检测到了替代VN滴度,与系统抗体水平相关的是与SPERKOPT抗原相比优于SpikeWt抗原的系统抗体水平(图一)。3F)。这些抗体效价表明,肠外接种可诱导粘膜保护性免疫。

猫疫苗接种-挑战研究

为了确定疫苗的有效性,猫要么接种VEEV RP疫苗生产EGFP(对照),优化的SARS-CoV-2S抗原(SPIKOPT),要么保留未接种疫苗(哨兵)。加强疫苗接种三周后,猫暴露在黏膜SARS-CoV-2挑战使用鼻内和口腔路线,并采取了如图所示的样本。4A.

图4:猫的免疫接种试验。
figure4

A动物手的时间线。V=疫苗接种,B=血液取样,O=口咽拭子,N=鼻拭子,(All)=所有动物,(Ch)=只攻击动物,(Sen)=只哨兵动物。B在接种后21天和42天用SARS-CoV-2病毒中和试验测定血清中和抗体滴度(d.p.v.)在未接种疫苗的(对照组)或穗型猫中选择接种疫苗.C用SARS-CoV-2B.1.1.7变异病毒测定血清中和抗体滴度,在未接种疫苗的对照组(对照组)接种后42天,或在未接种疫苗的猫(SPIKOPT)中检测。D用SARS-CoV-2病毒中和试验测定小鼠血清中和抗体滴度,分别在攻击当天、接种后42天和免疫后14天进行血清中和抗体滴度测定,并对免疫组动物(固体灰)、未接种前哨动物与对照组动物(灰带图案)、Spike opt抗原免疫动物(实心橙色)、或与Spike OPT抗原免疫动物共养的非免疫前哨动物(带图案的橙色)进行了血清中和抗体效价的测定。测定口咽拭子中SARS-CoV-2病毒滴度(E)或鼻拭子(F)在挑战后8天的−(D.P.C.)所有实验均在Vero E6细胞上进行。

接种疫苗后,任何一只猫在任何时间点均未发现不良反应。VEEV-RP疫苗产生SPECOPT抗原后,能在所有猫体内诱导病毒中和抗体滴度,第二次疫苗接种后,抗体滴度提高,并在3.5周后维持水平(如图所示)。4B)。疫苗诱导的抗体也能有效地中和SARS-CoV-2B.1.1.7变异体。4C一种最近与猫的临床表现有关的菌株14。控制和未接种疫苗的哨兵动物在任何时候都是阴性的,直到挑战。无论是接受挑战的猫还是哨兵猫,在挑战后都没有表现出任何临床症状。然而,十分之九的对照组对猫口服液中的病毒进行了攻击(图一)。4E)和鼻部(图1.4F)挑战后一天,观察期间至少3天。这些数据表明,黏膜SARS-CoV-2的挑战导致有效的病毒复制在呼吸道。较高和更一致的病毒脱落是从鼻冲洗,而口咽拭子显示出一个不一致的模式,这是未知的原因。有趣的是,在攻击后一天,两只未接种疫苗的哨兵从鼻腔冲洗中也检测到了病毒的脱落。此外,与受挑战的控制猫一起生活的所有五只哨兵动物至少在两天内通过口服途径传播病毒,这证明了病毒从受挑战的控制动物到哨兵动物的有效传播(图一)。4E).

接种疫苗的猫中没有一只口服液中含有任何可检测到的病毒。4E)或鼻音(如图所示)。4F)在挑战之后的任何时间点。结果表明,疫苗可以预防感染。此外,在未接种疫苗的猫的哨兵中没有检测到病毒,考虑到在接种疫苗的猫中缺乏病毒复制,这是可以预料的。对病毒中和抗体效价的分析证实了控制、挑战和哨兵动物都受到了有效的感染(图一)。4D)。相比之下,在被接种疫苗的猫饲养的哨兵动物中,没有观察到血清转换。因此,产生SPECOPT抗原的VEEV RP疫苗似乎能诱导保护性免疫,并防止从感染到天真猫的传播。

讨论

随着大规模流行和自然发生的SARS-CoV-2感染各种动物物种的报道,了解这种病毒在这些动物种群中的流行病学是很重要的,特别是在建立潜在的储存库、突变以及在其他物种内部和向其他物种传播方面。Sars-cov-2人类感染可以传染给猫,并假设猫对猫传播病毒可以在自然环境中发生。1。以前曾证明sars-cov可以在猫之间传染和传播。23但是,随着SARS-CoV从人类身上迅速根除,人们还没有完全了解猫感染的全部流行病学情况,直到它达到大流行的地步。SARS-CoV-2的情况是不同的,因为它已经成为一个全球性的问题,有可能在人类中成为地方病。虽然被感染的猫被认为是传染给人类、其他猫和其他物种的SARS-CoV-2的低风险,但考虑到被感染的猫会长时间地脱落病毒,而这些病毒可能会被气溶胶化,这就使人相信猫可能在病毒流行病学中发挥某种作用,要么通过传播病毒,要么使进一步的变异,要么充当病毒的宿主。虽然不建议对猫进行常规疫苗接种,但如果流行病学情况发生变化,则可迅速生产、更新并减少或防止猫与其他动物之间病毒复制和传播的疫苗将是有用的。此外,一种可用于一系列易感动物物种的疫苗更可取。

我们研制了一种安全有效的VEEV复制子粒子疫苗。我们的数据表明,以编码预融合的复制子粒子进行的初级增强免疫能够稳定S免疫原诱导的血清和粘膜组织中的中和抗体反应,并对所有猫体内的SARS-CoV-2攻击提供充分的保护。

在免疫研究的基础上,将S抗原设计与呋喃裂解位点突变(FCS)相结合。穆特)在豚鼠和猫体内对中和抗体反应的鲁棒诱导作用最为关键,说明这种预融合S稳定修饰能提高免疫原性。在豚鼠实验中,值得注意的是,肌内接种引起了一定程度的黏膜抗体滴度,这有点令人吃惊,很可能是从血清学诱导中清除出来的。这些抗体是否有助于猫体内这种候选疫苗的保护性免疫还有待确定。

优化后的S RP疫苗在一次免疫后成功地诱导了所有免疫猫的病毒中和抗体反应,而第二次免疫则促进了这一反应。此外,疫苗能够预防所有接种过疫苗的猫的感染,这表现在免疫后缺乏病毒再隔离。虽然猫体内有很强的血清学反应,但没有如豚鼠实验所证明的那样,在呼吸道中是否存在中和抗体。此外,我们没有研究细胞免疫在预防猫感染中的作用,也无法延长实验来研究诱导的免疫反应的持续时间。通过肠系膜外注射冠状病毒疫苗诱导局部保护的能力还没有得到很好的证实,在某些兽医用的呼吸道冠状病毒感染中,使用黏液作用的减毒活疫苗来减少最初感染部位的病毒复制。这些活疫苗诱导的保护时间相对较短,因此它们被灭活的全病毒疫苗所刺激,以建立更长的免疫力。仅在这些兽医环境中使用灭活疫苗,在保护局部呼吸道方面不如现场启动灭活助推器有效。24。因此,令人欣慰的是,一种肠外注射疫苗确实在猫模型中提供了呼吸保护。今后的工作将需要确定单一疫苗剂量是否也足以保护猫免受感染。此外,目前还没有为这种疫苗确定最佳接种时间表,也没有确定可诱导的免疫持续时间,以及预防感染和传播的能力是否在这段时间内持续存在。

本工作证明了基于tc-83复制子粒子疫苗平台的应用。®)。以VEEV为基础的rp疫苗曾被证明能保护猫免受病毒疾病的侵害,包括对临床症状的一些呼吸道保护,以及猫胼胝病毒感染模型中的病毒脱落,此外,还被证明对多种物种(包括狗、马、猪、牛、鸡和鸭)都是有效的。28、作者未发表的意见。此外,以VEEV为基础的rp疫苗表达来自其他冠状病毒的S蛋白,已被证明能诱导病毒中和抗体。36。基于RP的技术的优点是,如果已知感兴趣的基因编码保护性抗原,疫苗就可以快速制备。该疫苗平台是安全的,因为rp疫苗经历了一个非生产性的复制周期,复制的rna,但不复制病毒,不需要佐剂。31.

迄今为止,恒河猴、仓鼠和雪貂已被用作SARS-CoV-2的自然动物模型。在这些动物中,感染通常是无症状的或导致轻微的临床疾病。由于SARS-CoV-2还会在猫体内引起无症状感染,这一物种也可能为研究病毒的传播提供一种手段,特别是通过气溶胶和疫苗设计来防止呼吸道的最初感染。在某些方面,猫的感染可能模仿人类感染的大多数是无症状的。

本研究表明,一种表达稳定的SARS-CoV-2S蛋白的VEEV复制子疫苗能够诱导免疫猫血清中高水平的病毒中和抗体,并且诱导的应答能够防止上呼吸道感染,从而防止传染给其他猫。


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