抗CD 20治疗多发性硬化患者sars-cov-2 mRNA免疫后的细胞免疫和体液免疫应答

SARS-CoV-2信使RNA疫苗在健康个体中产生对新冠肺炎的免疫保护.然而，对于SARS-CoV-2mRNA疫苗在免疫抑制患者中的诱导反应知之甚少.我们研究了抗CD 20抗体单抗治疗对多发性硬化(MS)患者抗原特异性抗体、B细胞和T细胞反应的诱导作用。n=20)与健康对照组比较(n10)BNT162b2或mR-1273mRNA接种后。抗CD 20单克隆抗体(ACD 20)治疗后，大多数患者血清特异性和受体结合域(RBD)特异性抗体和记忆性B细胞反应明显减少，随着治疗时间的延长和B细胞重建程度的延长而改善。相比之下，所有接受aCD 20治疗的MS患者接种疫苗后都会产生抗原特异性CD4和CD8 T细胞应答。ACD 20倾斜反应的治疗，损害循环滤泡辅助T(T)FH)细胞反应和增强CD8 T细胞诱导，同时保留1型辅助T(T)H1)细胞启动。ACD 20缺乏抗RBDIgG的MS患者循环T细胞缺陷最为严重。FH反应和更强的CD8 T细胞反应。这些数据定义了sars-cov-2疫苗诱导的aCD 20患者免疫景观的性质，并提供了对mrna疫苗诱导的人类免疫应答的深入了解。我们的发现对免疫抑制患者，包括那些接受aCD 20治疗的患者的临床决策和公共卫生政策具有重要意义。

冠状病毒病19(新冠肺炎)已引起全球大流行，具有深刻的公共卫生和社会经济后遗症，原因是缺乏对SARS-CoV-2的保护性免疫，这是引起TAY病毒感染的原因之一(参考文献)。1,2)。疫苗迅速发展，其目标是保护个人和实现群体免疫。3。美国食品和药物管理局紧急使用授权的两种mRNA疫苗BNT162b2(辉瑞生物技术公司)和mRNA-1273(现代疫苗)在健康个体的第三阶段临床试验中被证明在预防中至重度新冠肺炎方面是非常有效的(参考文献)。4,5)。包括多发性硬化症在内的潜在自身免疫紊乱患者和接受免疫调节疗法的个体不包括在这些试验中。因此，mrna疫苗免疫反应的规模和质量在这些潜在易受感染的患者中并不是很好的特征，他们可能面临着更大的新冠肺炎相关发病率和死亡率的风险，并且更容易感染他人。6,7,8,9,10,11,12.

基于aCD 20的B细胞消耗策略在血液系统恶性肿瘤中的应用13以及各种自身免疫性疾病14，包括MS15,16。在抗原暴露时，B细胞可以形成记忆B细胞或分化为浆细胞和浆细胞。17。结果，acd 20治疗后，疫苗特异性抗体应答减少。18,19,20,21,22,23。在sars-cov-2 mrna疫苗接种中，B细胞缺失导致慢性炎症性疾病患者的特异性抗体下降。24，包括MS患者25。然而，抗体反应的动力学及其与外周B细胞耗竭和棘特异性记忆B细胞的关系尚不清楚。

B细胞在T细胞启动、分化和增殖中的作用尚不清楚，特别是在人类中。一些研究表明，T细胞反应不需要B细胞26,27,28而其他工作则支持B细胞作为抗原提呈细胞，促进T细胞启动。29,30,31,32,33,34,35。在新冠肺炎中，CD4和CD8 T细胞免疫产生，在某些环境下，T细胞反应与更好的结果相关。36,37,38。强烈的CD8 T细胞反应与改善新冠肺炎患者血液系统恶性肿瘤患者的存活率有关，包括治疗消耗B细胞的患者。39。这些数据表明，在缺乏抗体反应的环境中，T细胞可能提供保护性免疫，并限制严重疾病的发生。此外，T细胞还能识别变异的sars-cov-2变异体。40,41可以部分逃脱体液免疫。尽管有这些数据，在B细胞消耗疗法的患者中，通过mrna疫苗诱导T细胞反应是很难理解的。

在本研究中，我们分析了MS患者，以评估aCD 20治疗对SARS-CoV-2mRNA疫苗应答的影响。虽然大多数接受aCD 20(MS-aCD 20)治疗的MS患者产生了可检测到的尖峰结合抗体，50%的患者产生了RBD抗体，但抗体滴度较健康对照组降低、延迟，中和活性降低。所有接受aCD 20治疗的MS患者均出现特异性的CD4 T细胞反应，CD8 T细胞反应增强。最后，将使用aCD 20治疗的MS患者与未产生抗rbd IgG反应的患者进行比较，发现免疫应答协调不同，疫苗诱导的循环T显著减少。FH在缺乏抗RBD抗体的人群中，细胞反应和CD8 T细胞反应增强.这些研究为B细胞和体液免疫在疫苗诱导的T细胞反应中的作用提供了深入的见解，并揭示了伴随aCD 20免疫应答的免疫机制。

ACD 20治疗对mrna疫苗抗体应答的影响

为了研究aCD 20治疗对SARS-CoV-2mRNA免疫应答的影响，我们招募了20例接受aCD 20单抗治疗的MS患者，并将其疫苗诱导的免疫应答与10名健康对照者进行了比较(扩展数据图)。1)。所有MS患者和健康对照者均无新冠肺炎的临床症状或症状。在接种前后的5个时间点分析血浆和外周血单个核细胞(PBMCs)。1A).

a、纵向研究设计、疫苗接种方案和接种SARS-CoV-2mRNA后收集的时间点，用于健康对照组和用aCD 20治疗的MS患者。b,c、抗穗IgG(b)和抗RBD IgG(c)在健康对照组和接受aCD 20治疗的MS患者中，对收集到的所有时间点(T1~T5)进行了测量。采用未配对、双尾、非参数Wilcoxon检验进行统计分析.条形图代表平均±S.E.M。d，顶部：CD 19的频率+B细胞在健康对照组和接受aCD 20治疗的MS患者中占淋巴细胞总数的百分比。底部：CD 19总频率的相关性+B细胞和最近一次aCD 20输注后的几周。用非参数Spearman秩相关法计算相关系数。e免疫后T_4(左)和T_5(右)B细胞基线(T1)百分率与抗穗型IgG或抗-RBDIgG水平的相关性。只有用aCD 20治疗的MS患者才被考虑为相关因素，并以健康对照作为视觉参考。用Spearman秩相关法计算关联，并用Pearson趋势线进行可视化显示。f,g，尖峰频率+ (f)和尖峰+RBD+ (g随着时间的推移，接种疫苗的人记忆B细胞。数据表示为抗原特异性细胞在淋巴细胞总数中的频率(左：个别点，对数量表；右，平均95%顺式，线性标度)。h,i，尖峰频率之间的相关性+ (h)和尖峰+RBD+ (i)记忆B细胞及上次输注aCD 20后数周。用非参数Spearman秩相关法计算相关系数。灰色健康对照者(n橙色：用aCD 20治疗MS患者(n=20)。

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所有健康对照在第一次注射mRNA疫苗后产生抗穗和抗RBDIgG，第二次接种后抗体增加(见图)。1B，c)，如报告所述42。相比之下，在接受aCD 20治疗的MS患者中，反应变化更大，89%的患者出现了可检测到的抗穗型IgG，而T5检测到的抗RBDIgG反应仅为50%(图5)。1B，c以及扩展数据图。2)。与正常对照组相比，经aCD 20检测IgG治疗的MS患者血清IgG水平普遍降低，IgG反应动力学延迟。此外，MS-aCD 20组T4和T5产生的中和抗体明显减少(扩展数据图)。3A)。中和抗体滴度和结合抗体滴度对患者和健康对照者均有相关性(扩展数据图)。3B)。这些发现延续了以前的观察结果。24,25对SARS-CoV-2mRNA疫苗的抗体应答在接受aCD 20治疗的MS患者中减弱.

由于aCD 20治疗的MS患者抗体反应改变的主要原因可能是B细胞的耗竭，我们考虑了抗体反应的异质性(图一)。1B，c)与接种持续时间和最后一次注射aCD 20有关。有增加血清学反应的趋势，这两个尖峰(扩展数据图)。3C)和RBD(扩展数据图)。三维空间)随着最后一次aCD 20输注持续时间的延长。为了进一步验证这一思想，我们量化了cd 19。+流通中的B细胞数(扩展数据图)。3E)。虽然aCD 20治疗的MS患者大多没有B细胞，但部分患者存在较小的循环B细胞，且自上次注射aCD 20以来的时间与B细胞重建的程度有着明显的关系(图一)。1D)。免疫前循环B细胞百分比较高的aCD 20治疗的MS患者(T1)在T4和T5时有更强的抗穗和抗RBD IgG反应(图5)。1E)，表明疫苗免疫时mRNA抗体反应与B细胞重建程度之间存在相关性。少数接受aCD 20治疗的MS患者在接种疫苗后获得了相当的抗体滴度，其循环B细胞频率可与健康对照者相当。1EACD 20输注后B细胞再填充，提示B细胞在功能上是有能力的。因此，当循环中的B细胞池自上一次注射aCD 20以来随着时间的增加而重新填充时，疫苗诱导的抗体反应接近于健康对照组观察到的抗体反应。

ACD 20对疫苗诱导抗原特异性记忆B细胞的影响

接下来，我们使用了SPAR和RBD B细胞探针策略。42目的：研究sars-CoV-2 mRNA免疫治疗的MS患者记忆B细胞反应的大小和动力学。方法)。虽然循环记忆B细胞专为两个尖峰(扩展数据图。3F还有无花果。1F)和RBD(扩展数据图)。3F还有无花果。1g)在所有健康对照组中都很容易被诱导，在接受aCD 20治疗的MS患者中，只有一部分患者检测到了尖峰特异性记忆B细胞，其频率也显著降低(图一)。1F)在所有时间点(补充表1)。同样，使用aCD 20治疗的MS患者中只有少数产生可检测到的RBD特异性记忆B细胞(图1)。1g和补充表1)。最后，抗原特异性记忆B细胞的检测与上一次aCD 20治疗后的持续时间有很强的相关性(图1)。1H，I)。抗体应答率(88.9%)明显高于循环记忆B细胞(30%)，提示B细胞在血前淋巴组织中的再增殖作用。然而，总的来说，这些数据表明SARS-CoV-2mRNA疫苗接种后的记忆B细胞反应与健康对照组相比受到损害，尤其是在最近一次注射aCD 20时更接近免疫的患者。

ACD 20对疫苗诱导的CD4 T细胞应答的影响

ACD 20治疗对SARS-CoV-2mRNA免疫T细胞反应的影响尚不清楚.为了检验这一问题，我们对sars-cov-2 mrna疫苗接种后的循环T细胞群进行了高维流式细胞仪分析，并进行了优化。t-分布式随机邻居嵌入(opt-SNE)降维，然后是FlowSOM聚类(补充图)。1以及扩展数据图。4)。检查CD4总数+随着时间的推移，T细胞景观显示了mRNA接种后的动态变化(扩展数据图)。4A)。总景观用关键标记绘制(扩展数据图)。4B与CD4 T细胞的不同亚群相对应的元细胞被定义(扩展数据图)。4C，d)。第一次接种疫苗后，在健康对照人群中发现了一组小的异亮氨酸(Metacluster9-14)，表达高Ki 67、CD 38、诱导共刺激因子(ICOS)和人类白细胞抗原-DR亚型(HLA-DR)，与疫苗诱导的活化T细胞一致。这些代谢物在MS-aCD 20组中的动态变化较小，在T2和T4时的诱导更为微妙。在T2或T4时，MS-aCD 20与健康对照组相比，这些代谢物的丰度无明显差异(扩展数据图)。4E)。接下来，我们想深入了解MS-aCD 20患者接种疫苗引起的CD4 T细胞亚群，并与健康对照组进行比较。

人类接种疫苗诱导Ki 67+CD 38+免疫后约1-2周，CD4和CD8 T细胞；这个活化的增殖亚群含有抗原特异性T细胞。43,44,45,46。与以前的报告一致47，人口67+CD 38+CD4 T细胞在健康对照组第一次接种疫苗后被诱导，在T2达到高峰，然后回到基线(如图所示)。2A和补充图。1)。用aCD 20治疗的MS患者在基线时有相似的活化CD4 T细胞频率。然而，他们的Ki 67+CD 38+第2次接种后CD4 T细胞较健康对照组少，第2次接种后CD4 T细胞无明显增加，通过T5仍低于健康对照组(图5)。2A)。激活的Ki 67的比较+CD 38+CD4 T细胞显示与接种疫苗或时间点无关的景观差异，用aCD 20治疗的MS患者与健康对照者(图一)。2B)。然而，疫苗引起的ki 67亚群体的变化也有明显的模式。+CD 38+CD4 T细胞。有较强的Ki 67或CD 38表达区域，也有表达FOXP 3、CTLA-4、CXCR 5、CXCR 3、CCR 6、T-bet和其他与活化CD4 T细胞亚群相对应的激活标志的区域(图1)。2C-e以及扩展数据图。5A)。疫苗接种后，发现额外的代谢物明显富集。特别是，在T2和T4时，Metacluster 1增加，而Metacluster 7在T2和T4时都增加(见图)。2F)。Metacluster 1由高度活化的Ki 67组成。++ICOS++CXCR 3+T-打赌中中央记忆中的CD4 T细胞厘米)/1型效应器存储器(T)EM1)表型(T)厘米/TEM1 TH1细胞)。Metacluster 7代表CCR 6+T-打赌−或CXCR 3+T-打赌中 T厘米/TEM1高ICOS的CD4 T细胞(T)厘米/TEM1 TH17-和TH1-样细胞)。MS-aCD 20疫苗接种后这两种代谢物的动态变化与健康对照组相似(图1)。2F)。接下来我们试图了解循环T的反应。FHT细胞FH支持抗原特异性B细胞反应的细胞。Metacluster 3是激活的(CD 38)+ICOS+赫拉博士+)，增殖(Ki 67)+)高表达CXCR 5和Pd-1的亚群体。2E)，对应于激活循环T。FH细胞。同样，在第一次注射疫苗后，用aCD 20治疗的MS患者和健康对照者也同样诱发了这一变光体(如图1所示)。2F以及扩展数据图。5B)。然而，在第二次疫苗接种后，通过T5，美沙星3按比例下降(如图所示)。2F)和合同(扩展数据图。5B)用aCD 20治疗的MS患者与健康对照组比较。因此，这项分析确定了CD4 T细胞的亚群，当将接受aCD 20治疗的MS患者与健康对照者(例如，活化T细胞亚群)进行比较时，CD4 T细胞对接种疫苗的反应类似。H1细胞)和循环T细胞FH在这两个队列中有相似初始诱导的细胞，但在用aCD 20治疗的MS患者中维持性差。

为了检测真性抗原特异性CD4 T细胞反应，我们进行了尖峰肽依赖性激活诱导标记(AIM)检测。方法)。目标+CD4+T细胞共表达CD 200和CD40L。3A以及扩展数据图。6A)。在AIM肽刺激试验中B细胞的缺失对此分析没有影响(扩展数据图)。6B)。第一次注射sars-cov-2 mrna疫苗后，+CD4 T细胞在MS-aCD 20和健康对照组中显著增加，表明CD4 T细胞启动有效(图1)。3B)。健康对照组保持高AIM水平+CD4 T细胞频率在随后的所有时间点都有增加的趋势，在第二次疫苗剂量之后(如图所示)。3B)，这与我们以前的研究是一致的。47。目标+用aCD 20治疗的MS患者的CD4 T细胞反应在所有时间点与健康对照者相当(图1)。3B)。为了进一步评估记忆T细胞亚群，我们对AIM进行了细分。+CD4 T细胞转化为T细胞厘米，三种不同的效应记忆T细胞亚群(T细胞)EM1、TEM2、TEM3)和T埃姆细胞重新表达CD45RA(T)埃姆拉)(图1.3C以及扩展数据图。6C)。AIM的分布没有重大差异。+用aCD 20治疗的MS患者与健康对照组CD4 T细胞亚群中的CD4 T细胞+CD4 T细胞与T细胞的映射厘米和TEM1子集(图1.三维空间)两组。同样，我们使用CXCR 5，CXCR 3和CCR 6(图6)。3E以及扩展数据图。6d)检查CD4 TH细胞亚群。虽然队列之间的分布大致相似，但循环T的频率有下降的趋势。FHAIM细胞总数+-MS-aCD 20组CD4 T细胞应答。3F以及扩展数据图。6E)。因此，这些数据表明，接受aCD 20治疗的MS患者，尽管抗体应答减弱，但仍能对这两种疫苗产生强有力的抗原特异性CD4 T细胞反应。

ACD 20对疫苗诱导的CD8 T细胞应答的影响

接下来，我们检测了免疫后用aCD 20治疗的MS患者和健康对照者的CD8 T细胞反应。我们首先评估了激活的Ki 67+CD 38+CD8 T细胞(图1.4)CD4 T细胞。第一次接种疫苗后，激活的CD8 T细胞在两组人群中都有一定程度的增殖，但对于健康对照组来说，增加的幅度更大(图1)。4A)，可能是由于MS-aCD 20组免疫前(T1)CD8 T细胞活化增高所致。然而，与健康对照组相比，用aCD 20治疗的MS患者对第二次疫苗剂量的反应要强得多。接下来，我们对CD4 T细胞应用上述的元光彩方法来询问疫苗应答的ki 67的分化状态。+CD 38+CD8 T细胞(图1.4B-f和扩展数据图7)。活化CD8 T细胞的op-sne地形图显示，接受aCD 20治疗的MS患者在接种疫苗前与健康对照组之间存在差异，其中包括CD 27的丰富程度。+ICOS+CD 38+与CD 27相比，aCD 20治疗的MS患者CD8 T细胞主要缺乏T-bet。−T-打赌+健康对照组CD8 T细胞。4B)。然而，患者和健康对照组的活化CD8 T细胞群在每次接种疫苗后重新定向，因此他们占据了一个类似的选择-SNE空间(图1)。4B)。Metacluster定义了这些疫苗引起的变化(图1)。4D-f和扩展数据图7)。具体来说，第一次接种疫苗后，两组患者的主要疫苗应答群体是甲环内酯7和8(图1所示)。4B，f)，代表TEM1CD8 T细胞具有高T-bet、ICOS和CXCR 3。Metacluster 8高表达HLA-DR、CD 38和Pd-1，在T2时占活化的CD8 T细胞池的比例大于Metacluster 7(图7)。4E，f)。Metacluster 6是两组在第二次疫苗接种后富集的优势种群(图1)。4B，f)。与Metacluster 7和8一样，Metacluster 6是T。EM1表示T-bet的子集。而Metacluster 6表达中或高HLA-DR和PD-1，而ICOS、CXCR 3和CD 38的表达较低(图7和8)。4E)。因此，这些高维流式细胞仪数据表明，与健康对照组相比，第二次接种疫苗后，用aCD 20治疗的MS患者对疫苗激活的CD8 T细胞反应更强。此外，应答性CD8 T细胞亚群以T-bet为主。+ TEM1细胞具有不同程度的激活和CXCR 3的表达。

a，激活Ki 67的频率+CD 38+CD8 T细胞总数非幼稚CD8 T细胞。顶部：显示每个组的个人(点数)和平均(较粗的线)。底部：每个时间点和组的图基盒图(中位数、Q1和Q3四分位数)。采用不成对的双尾Wilcoxon检验方法，对两组在每一时间点(在方框图下)或在所指示的时间点(如方框图上所示)的分组进行比较。b，对活化的Ki 67的串联细胞数据进行ope-sne投影。+CD 38+CD8 T细胞在每个时间点和组组合显示。c，在与所有样本一起生成的opt-sne 2D地图上投射的指示标记的表面表达强度。b(颜色标度：日志标度中每个单个标记的MFI表达式)。d，用激活的Ki 67创建了FlowSOM元光泽器。+CD 38+CD8 T细胞从所有样本中连在一起，投射到OPT-SNE地图上。e中每一个标记的表面表达强度热图。d(色阶：行调整z-每个标记的得分表达式)。f，以活化的Ki 67的百分比计算6、7和8元亮光的丰度。+CD 38+CD8 T细胞显示为健康对照者和用aCD 20治疗的MS患者。未配对双尾Wilcoxon检验P值显示在P < 0.05 between groups. Gray, healthy controls (n橙色：用aCD 20治疗MS患者(n=20)。*P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0.001.

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接下来，我们用尖峰依赖性的AIM检测疫苗接种后抗原特异性CD8 T细胞的反应(图一)。5)。如报告所述47AIM+在第一次接种疫苗后，在健康对照组的一个子集中检测到CD8 T细胞反应，第二次疫苗剂量后有更多的人对此作出反应(图一)。5A，b)。在接受aCD 20治疗的MS患者中也观察到类似的模式。然而，在第二次接种疫苗(T4)后，与健康对照组相比，用aCD 20治疗的MS患者的抗原特异性CD8 T细胞明显增加，这一差异在t5持续存在。这个膨胀是由T主导的EM1细胞(图1.5C，d)与上述意见一致。值得注意的是，两组的总记忆子集的频率基本不变(扩展数据图)。8)。为了评价疫苗特异性CD8 T细胞的功能，我们检测了干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-2(IL-2)和颗粒酶B在免疫球蛋白中的表达。+CD8 T细胞在T4时的响应峰值(扩展数据图)9A-c)。在正常对照组和MS-aCD 20组中，T4区的CD8 T细胞同样有能力产生这些效应分子，而在接种前T1几乎没有颗粒酶B表达或抗原特异性细胞因子产生。综上所述，这些数据表明，虽然记忆性CD8 T细胞亚群的总体分布相似，但SARS-CoV-2mRNA疫苗接种在接受aCD 20治疗的MS患者中诱导了更强的抗原特异性CD8 T细胞应答，尤其是在第二次接种疫苗之后。

具有不同疫苗诱导免疫协调作用的ms-acd 20亚组

接下来，我们研究了B细胞缺失程度的变化如何影响aCD 20治疗的MS患者与疫苗诱导免疫应答的其他特征的协调。首先，通过对T2、T4和T5抗原特异性指标的比较，发现体液T与循环T有很强的相关性。FH答复(图1.6a，b)。这种相关性在MS-aCD 20组中是明显的，而且在更强的程度上是明显的.相比之下，AIM+MS-aCD 20组CD8 T细胞与T5的体液免疫特性呈显著负相关(图5)。6A，c)。目标+TH1细胞也不再与体液免疫的某些特征呈正相关，如健康对照组所观察到的(图一)。6A)。这些发现促使我们将接受aCD 20治疗的MS患者分成那些能检测到rbd特异性IgG反应(rbd抗体)的患者。+, n=10)和那些从未出现RBD特异性IgG反应(RBD抗体)的人−, n然后调查这两个亚组患者之间的其他潜在免疫差异。图形6d显示ki67的opt-sne投影。+CD 38+三组CD4 T细胞：健康对照；ms-aCD20RBD抗体+MS-aCD20RBD抗体−。Ki 67景观+CD 38+RBD抗体中的CD4 T细胞+Ms-acd 20患者与健康对照组及rbd抗体均相似。+Ms-aCD 20和健康对照组在接种过程中表现出一些重叠的时间变化特征。相反，RBD抗体−Ms-acd 20组显示ki 67的一个明显的opt-sne投影。+CD 38+CD4 T细胞与最小疫苗诱导的变化。为了量化这些差异，我们使用地球移动距离(EMD)度量所有配对比较，以计算Op-SNE地图中概率分布之间的相似之处。EMD显示正常对照组与RBD抗体在活化CD4 T细胞的整体结构上有相似之处。+MS-aCD 20例，RBD抗体−Ms-acd 20组在所有时间点上都与其他组有很大的不同(扩展数据图)。10A)。与活化的CD4 T细胞相比，第一次剂量(T2)后疫苗诱导的活化CD8 T细胞室的变化在rbd抗体中更相似。+抗体−Ms-aCD 20组，两者均类似于健康对照反应(图1)。6E和扩展数据图10b)。然而，在第二次疫苗接种(T4)后，rbd抗体+Ms-aCD 20组与正常对照组和rbd组均有明显差异。−Ms-aCD 20组(图1)。6E和扩展数据图10b这些数据表明，在不存在以抗RBDIgG为代表的功能性体液反应的情况下，aCD 20治疗的MS患者在疫苗诱导的CD4 T细胞应答中发现的缺陷被扩增出来。与对照组相比，aCD 20治疗的MS患者疫苗诱导的CD8 T细胞应答更为相似，抗RBDIgG水平的影响较小。

最后，我们评估用RBD IgG分离的aCD 20治疗的MS患者CD4和CD8 T细胞亚群的差异疫苗反应是否与诱导抗原特异性T细胞应答有关。MS-aCD20RBD抗体−组AIM的丰度明显降低。+循环TFHT_4和T_5细胞。6f)。相比之下，AIM+ TH1细胞RBD抗体相似+和RBD抗体−团体。值得注意的是，AIM+在ms-aCD20 rbd抗体中，CD8 T细胞疫苗反应明显增强。−患者与RBD抗体比较+患者在第二次接种疫苗后，支持SARS-CoV-2mRNA疫苗诱导的CD8 T细胞应答在缺乏B细胞和由于aCD 20治疗而产生抗体反应的患者中更为强烈的观点。这些数据共同强调了mrna疫苗诱导的免疫反应的相互关联和协调性质，并揭示了在使用aCD 20治疗的MS患者中潜在的“免疫健康”差异。

本研究的目的是评价aCD 20治疗对SARS-CoV-2mRNA疫苗应答的影响。ACD 20治疗在许多临床场合都有应用，包括癌症免疫治疗、风湿病和神经病学。在MS中，aCD 20治疗通常被用作单一疗法，其优点是研究其在其他并行免疫疗法相对较少混淆的病人群体中的作用。

虽然中和抗体在疫苗诱导的保护中可能很重要，但免疫的精确相关性还没有完全定义，最近的证据也指出T细胞的作用。36,37,38,39,48。尽管大多数接受acd 20治疗的MS患者的抗体反应不佳，但所有这些患者对sars-cov-2 mrna疫苗都产生了强劲的CD4和CD8 T细胞反应，这表明接种B细胞缺陷患者仍有可能对sars-cov-2提供某种程度的免疫，特别是考虑到T细胞可能保留对逃避抗体中和的新出现的变异体的认识。40,41。尽管保留了T细胞，但接受aCD 20治疗的MS患者在抗原特异性循环T中存在选择性缺陷。FH与健康对照组相比，aCD 20对缺乏RBD抗体应答的MS患者有更严重的影响。尽管其中一些变化可能会反映aCD 20对CD 20子集的影响。+T细胞49,50，这些数据也与T不仅是FH细胞为B细胞提供帮助51，但生发中心B细胞也影响最佳T细胞FH细胞反应52。相反，TH1细胞反应轻微受影响，CD8 T细胞反应增强，特别是在第二次疫苗接种后。虽然这些T细胞反应是应用aCD 20治疗的MS患者的有希望的免疫指标，但未来的临床研究将需要研究SARS-CoV-2感染的发生率、易受关注变异的程度以及原发性和继发性B细胞免疫缺陷患者的新冠肺炎结果，以充分了解这些患者在mrna疫苗接种后的临床保护程度。

B细胞在循环中的重建，如预期的那样，优先被检测到的病人，谁是远离他们的最后一次aCD 20治疗。该患者亚组更有效地产生抗棘和RBD的抗体和记忆B细胞，并且对mrna疫苗免疫的CD4和CD8 T细胞反应较少。疫苗诱导的体液反应的大小与B细胞在接种时的重建程度有关，而与接种与最后一次aCD 20注射之间的时间窗相关较好，提示B细胞重建是B细胞重建的潜在机制。因此，评估外周血B细胞的重新出现可能是比上次aCD 20治疗后更好的指标，以确定哪些患者在接种疫苗后将产生体液免疫，以及未来的增强剂量。

一个意想不到的发现是aCD 20治疗的MS患者，特别是未产生抗RBDIgG的MS患者，接种SARS-CoV-2mRNA后，疫苗诱导的CD8 T细胞反应更强，功能更强。这种差异在第二次接种疫苗后最为明显。这些结果是在没有循环B细胞的情况下，mRNA疫苗有效免疫启动的证据，这些发现也可能与mRNA疫苗在其他环境中的应用相关，例如B细胞缺陷患者的新抗原癌症疫苗。53。未来需要解决的一个重要问题是这种增强的CD8 T细胞反应的潜在机制。一种可能性是，在没有抗体的情况下，由于缺乏疫苗诱导的抗体的抗原清除能力，可以增加抗原的丰度来驱动CD8 T细胞的活化和增殖。另外，调节性B细胞可能在减弱CD8 T细胞反应中发挥直接作用54,55。第三种可能性是通过抑制性fc受体fcγrIIB对树突状细胞的作用而产生抗体或免疫复合物。56,57或CD8 T细胞58。今后的研究将有必要确定这些可能的机制的贡献。

总之，这些研究提供了SARS-CoV-2mRNA疫苗对经aCD 20治疗的MS患者免疫启动的有力证据。虽然这些患者大多没有产生最佳的抗体反应，但T细胞启动，尤其是T细胞的启动H1和CD8 T细胞，大部分是完整的。然而，aCD 20和B细胞缺乏的治疗与免疫反应和循环T的协调改变有关。FH反应受到损害。然而，尽管aCD 20治疗的目的是消除B细胞介导的免疫，包括B细胞在向CD4 T细胞呈递抗原方面的作用，但这些研究揭示了使用aCD 20治疗的MS患者体内残留免疫功能的变化水平。在未来，确定剩余的体液免疫和持续的或增强的T是很重要的。H1或CD8 T细胞反应分别保留了对新出现的SARS-CoV-2变异体的反应能力。我们还注意到，对mrna疫苗诱导的免疫反应的分析不仅可以测量对SARS-CoV-2的免疫力，而且还可以作为一种“分析疫苗”，为了解aCD 20治疗的MS患者的基本免疫健康和健康状况提供见解。总体而言，这些数据提供了关于免疫缺陷人群产生免疫反应的能力的关键见解，这将对这些患者的临床指导和针对弱势人群的可能公共卫生建议相关。