DNA测序样品制备指南
一、PCR产物：
1、未纯化: 确信PCR产物电泳检测条带清晰无杂带，片段长度通常大于200bp，提供浓度大于50ng/ul,总量必须大于2μg。
2、已纯化:电泳检测条带必须单一，纯度OD260/OD280=1.6～2.0。最好溶解在已灭菌的去离子水中，浓度要求＞50 ng/μl，提供10μl以上。同时请您提供PCR引物，并注明浓度。
注意事项：
（1)PCR产物的纯度是PCR产物直接测序成功的关键，所以提倡切胶回收PCR产物。如果有几条PCR产物长度相近，用电泳胶也无法分开，此时的PCR产物便无法直接测序。这种情况建议把PCR产物克隆后测序。
（2)PCR产物直接测序成功的另一要因是引物，测序用引物要求较高，引物的3’端必须与模板完全匹配，含有Mix碱基的引物一般不能测序(特别是3’端)。此外，测序引物长度一般为20个碱基左右，GC含量必须在50～60%左右。而且用于测序的引物一定要经过PAGE纯化，纯度必须大于90%。
（3)在PCR扩增时，难以扩增(扩增后的PCR带较弱)的PCR产物在测序时一般成功率较低。
（4)小于150 bp的PCR产物直接测序效果不好，建议克隆后测序。
二、质粒：
如果质粒纯度达到全自动测序的要求，即OD260/OD280=1.6～2.0，可以直接提供质粒。浓度要求＞200ng/μl，提供10μl 以上。 无论提供菌液或质粒，请您务必写明：
1、载体的名称和详细图谱
2、插入片段的大小和酶切位点
3、选取的测序引物名称和序列，并且标明测序引物距离插入片段的位置(注：测序引物以后可能会有20～30个碱基不明晰)
4、如果提供特殊测序引物，请写明序列，并且一定要提供经PAGE纯化的引物，浓度大于5pmol/μl
三、菌液：
1、说明载体抗病类型，我们提供常规抗生素为氨卞青霉素、卡那霉素、氯霉素。其余抗生素请自备并告知使用浓度。
2、应为高拷贝质粒，对于低拷贝质粒，请提供约1ug纯化质粒。
3、提供200ul以上过夜培养的新鲜菌液，装于1.5ml离心管中封口保存，防止交叉污染或泄漏。另外请确保菌种的准确性，如因菌种自身问题引起的任何测序结果误差，我们将收取全额的测序费用。
四、以下情况请您直接提供抽提好的DNA模板：
1、噬菌体DNA
2、低拷贝质粒
3、cosmid, BAC DNA
纯化DNA模板时请注意：纯化的DNA模板要求纯度高。纯化以后的DNA模板要溶解于无菌去离子水。浓度要求＞200ng/μl，(载体较大的，请提供＞500ng/μl)，提供10μl以上(一般情况下，经测序部检测合格后才可使用)。
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