放射免疫测定法

放射免疫测定法

放射免疫测定法(radiation immune assay, RIA)的技术类型很多，如再结合免疫技术，可用它作标本的定性、定量及定位分析等。另外，由于它是以最敏感的同位素作标记，所以本法的高敏感性是最重要的特点，测定结果可达ng～pg水平，这是现用一切检测微量抗原和抗体法所不可比拟的。

(一) 放射免疫超微量分析法 用其检测血清抗体时，用同位素如3H、14C、32P、131I或125I标记的病毒抗原与被检血清在37℃条件下一起孵育2小时，使二者相遇结合后，再加入抗γ球蛋白时，便与上述的抗原抗体复合物联结在一起，离心后，形成大的复合物沉淀下来，此时可用闪烁探测仪分别测量上清液和沉淀物的脉冲数，并计算出沉淀物放射性占总放射性的百分率，以此为指标，判定被检血清中有无相应抗体及其含量。

另外，也可用本法测抗原，依据的原理与上述测抗体的方法大致相同。区别是将已知抗血清和可能含有相应病毒抗原的被检标本一起孵育，如被检标本中含有相应的病毒抗原，则二者充分结合，再引入标记的已知病毒抗原时，由于已知抗体已与标本中的抗原结合，则不能再与引入的标记病毒结合，只能呈游离状态存在于上清液中，加入抗γ球蛋白时，则与已知抗体和被检病毒抗原的复合物相结合，离心后，这种大分子的结合物即被沉淀下来，应用闪烁探测仪分别测定上清液和沉淀物的放射性时，结果沉淀物的放射性明显低于上清液的放射性，如果被检标本中不含相应的病毒抗原时，则沉淀物的放射性明显高于上清液的放射性。

(二) 放射火箭电泳测定法   这种方法实际上是放射自显影与单向定量免疫电泳(即火箭电泳)相结合的一种测定技术。它的分辨力很高，有的能精确地测出细胞内分子水平的放射性物质的分布。

检测时，可先将被检抗原用3H、131I标记，滴加于含一定量的抗血清琼脂凝胶板孔中，电泳时，抗原在移动过程中，与琼脂板中的抗体在比例适当处，即形成抗原-抗体复合物，未结合的抗原继续向阳极移动，直至全部抗原与抗体结合完为止，这样就形成一个形似火箭的锥形沉淀峰。然后在经过干燥后的琼脂凝胶板上贴以X光胶片，于暗室中曝光12～14小时，取下感光胶片，放在显、定影液中，经过一段时间后，即可出现一个锥形沉淀峰的感光图形，根据峰高，对被测的标本作检定。

(三) 放射琼脂双向扩散自显影检查法 即将以131I等标记的阳性血清滴入琼脂板的中央孔内，再将阳性抗原及被检抗原滴加于周围的相应孔中，放湿盒中，于温箱内进行双扩散，反应毕，按上述方法对X光胶片曝光，自显影，最后根据胶片上出现的感光图形作分析。

放射性免疫测定法为病毒、细菌、寄生虫等的微量抗原、抗体和体液内微生物性抗原物质的检定提供了新的手段。目前已有用该技术对东、西方马脑炎、猪传染性胃肠炎、马传染性贫血、猪水泡病、鸡新城疫和口蹄疫等做检测的报告。