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酶联免疫吸附试验

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发表时间:2019-08-07 15:14作者:武汉新启迪Xinqidi来源:http://www.qidibio.com

酶联免疫吸附试验


酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immune sorbent assay, ELISA)是Engvall和Van weemen于1971年提出的。该法是以固相载体吸附技术和免疫酶技术相结合建立的一种检测方法,其操作简便,无需特殊设备,并具有高度的敏感性和准确性,所以受到大家的广泛重视,以致在较短时间内,于国内外均取得了较快的进展。


(一) 主要的技术类型 ELISA的技术类型很多,但以检测抗体的间接法,及测定抗原的双抗体夹心法最常用,现将其操作流程分别简介如下。


1. 间接法首先将已知标准抗原吸附在聚苯乙烯塑料反应板的相应孔中,然后加入被检血清,在温箱中作用一定时间,使形成的抗原抗体复合物均匀地附着在固相载体上,再滴加用辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗免疫球蛋白,则与固相载体上的抗原抗体复合物的抗体结合,当加入底物溶液时,H2O2在酶的催化下氧化,同时使无色的显色剂邻苯二胺(OPD)脱氢氧化,形成可溶性的氧化型棕色联苯胺,产生的颜色强度的差别,可用肉眼或特制的72型分光光度计检测,由此推算出被检血清中是否有相应抗体,以及含量的多少。


2. 双抗体夹心法首先将已知抗体球蛋白吸附在载体上,致敏后,冲洗除去多余抗体,滴加被测抗原,致敏后,冲去过剩抗原,滴加酶标抗体,室温下致敏后,冲洗除去过剩的标记抗体,加入底物溶液显色后,再加入终止剂,以终止反应的进行,最后根据反应孔中颜色的深浅,对被检抗原作出检定。

(二) 在微生物检测方面的应用   ELISA技术问世以来,已广泛用于各种病原微生物,如病毒、细菌、真菌、支原体、立克次氏体、衣原体、螺旋体等及其抗体的检测,在微生物检测和疾病诊断方面发挥了重要作用,通过试剂和检测方法的标准化,组装的ELISA诊断试剂盒,已在临床上得到了广泛的应用。

(三) ELISA的特点 灵敏度高,检测能力可达10-6mg/ml水平;应用范围广,既能检测抗原又能检测抗体,既能定性又能定量;有效期长,酶标抗体于普通冰箱中可保存一年以上,效价不下降,制成的标本,可长久保存,供随时复查用。


[附]: 免疫酶染色法(组化法) 该法的原理与免疫荧光法相似,不同之处在于用酶标记的抗体,称酶标抗体。酶标抗体与抗原发生特异性结合,当加入酶的底物时,底物在酶的催化下,发生组织化学反应,产生有色物质,该物质不需特殊仪器,在光学显微镜下即能观察,目前常用的酶是HRP,底物为DAB,可生成棕褐色沉淀物,使玻片组织标本上的抗原所在部位呈现颜色。


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