体外及体外扩增的人白细胞介素2特异性表达pPARγ 为了从功能和激活的角度对ILC2s进行表征，我们从健康供者(HD)PBMC中提取了ILC1s、ILC2s和ILCP的RNA-seq分析，并比较了它们的转录标志(ArrayExpress E-MTAB-8494)。我们特别关注脂肪酸代谢相关基因，这些基因与蠕虫感染期间的ILC 2反应相关，我们发现pPARγ( PPARG )在ILC2s中表达较多，与其它ILC子集相比(图1)。 1A ，左面板)，而pPARα( PPARA )和pPARβ( PPARD )在各亚组中均有表达(如图所示)。 1A ，右面板)，也得到了qPCR的证实(如图所示)。 1B )。从mRNA和蛋白水平分析PPAR在体外扩增的ILC亚型中的表达情况，并进行了类似的观察(见图)。 1C，d )。鉴于ILCs被认为是CD4 T辅助亚群的固有镜像，我们分析了PPAR在ILC1s、ILC2s和ILCP中的表达，即Th1、Th2和Th17细胞。 PPARγ 在人Th2和Th17细胞中有较好的表达，而对Th1细胞则无明显影响(补充图)。 1A，d )，与小鼠相反，pPARγ蛋白主要在Th2细胞中表达。 22 。综上所述，这些发现表明 PPARγ 在人白细胞介素2，这也是在体外培养期间保持。
图1：人体外和体外扩增的ILC2s特异性表达pPARγ。 a 与脂肪酸代谢相关的蛋白质(斜体)或与pPARγ的蛋白-蛋白质相互作用(黑体字突出显示)的z行热图。脂肪酸代谢基因摘自“脂肪酸代谢过程”基因本体基因集(GO：0006631， Http://geneontology.org/ )。将RNA测序计数转化为对数2/百万计数，用R的VOM函数拟合每个基因的线性模型进行差异基因表达分析(v.3.38.3)，然后用在LIMMA软件包中实现的经验Bayes统计模型进行适度的t统计计算(见Ercolano等人)。 1 关于详细方法)。与ILC1s和/或ILCP相比，ILC2s中显著上调的基因使用*( n =3；* P < 0.05). Proteins putatively involved in protein–protein interactions were taken from the STRING database (Https://string-db.org/ ). b 表达 PPAR 人新排序ILC子集(开方ILC1s、开圆ILC2s、开三角形ILCP)的qPCR评估(ILC1s) n =6；ILC2s和ILCPs n =7；ILC1s诉ILC2s** P =0.0032，ILC2s对ILCP** P =0.0021)。 c 表达 PPAR 体外扩增人ILC亚群(开放方ILC1s、开圆型ILC2s、开三角形ILCP)(ILC1s和ILCPs)的qPCR评价 n =3；国际法委员会第2s n =5；ILC1s诉ILC2s* P < 0.0001, ILC2s vs ILCPs *P =0.0020)。 d 与ILC1s和ILCP比较，蛋白水平上PPARγ在ILC2s表达的Westernblot分析(一个个体实验)。每个符号代表一个单独的捐献者。数据显示为平均值±扫描电镜，并进行了单次分析。b )或双向( c )方差分析。源数据作为源数据文件提供。
PPARγ抑制人白细胞介素2s分泌2型细胞因子 为了更好地阐明pPARγ在ILC2s中的作用，我们分析了pPARγ拮抗剂T 0070907与非毒性浓度的T 0070907预孵育后，IL-33/IL-25(又称IL-25)刺激的细胞因子的产生情况。 23 。如图所示。 2A，b T 0070907处理的ILC2s产生的IL-13明显低于对照ILC2s。此外，其他ILC 2特异性细胞因子也有降低趋势，包括IL-4和两两调节素(AREG)(如图所示)。 2B )24 。T 0070907处理前后细胞培养上清液中细胞因子的定量结果证实了上述结果。 2C )。这个额外的读数使我们能够观察到T 0070907不仅以浓度依赖性的方式减少了IL-13的分泌(补充图)。 2A )，而且在预处理后的ILC2s中也含有IL-5(如图所示)。 2C )。为了验证T 0070907对PPARγ的选择性抑制作用，我们用靶向γ的小干扰RNA(SiRNA)转染人体外扩增的ILC2s。QPCR分析证实了PPARγ的基因敲除(附图)。 2B )。与药物抑制作用一致，PPARγ沉默导致细胞因子的产生和分泌显著减少(附图)。 2C-e )。这种对2型细胞因子分泌的影响可能至少部分是PPARγ与过氧化物酶体增殖物反应元件结合的直接结果，因为我们在IL-5和IL-13基因启动子区域发现了部分与人PPARγ-维甲酸X受体α(RXRα)异源二聚体结合的动机。 二维空间 ，补充数据 1 )。为了证实这一发现，我们在细胞因子鸡尾酒刺激和T 0070907处理的人膨胀的ILC2s上进行了染色质免疫共沉淀(芯片)。结果表明，PPARγ与细胞因子激活的ILC2s中IL-13启动子直接结合。 2F )。越来越多的报道显示PG合成与pPARγ激活直接相关。 25 ,26 ,27 。特别是最近有报道说，环氧化酶(Cox)是PG产生的关键限速酶，抑制细胞因子刺激的ILC2s分泌IL-5和IL-13。 19 。基于这些数据，我们推测COX和PPARγ可能对IL 2细胞因子的分泌产生协同作用。因此，我们用T 0070907和celecoxib(Cxb)联合治疗ILC2s。 19 。虽然没有统计学意义，但我们观察到这种治疗会导致IL-13和IL-5分泌的部分减少(补充图)。 2G ).
图2：pPARγ维持人白细胞介素2型细胞因子分泌。 a 以T 0070907为代表的流式细胞术分析白细胞介素-13(IL-13)治疗前后(蓝点图)及未处理(红点图)。 b T 0070907治疗前后白细胞介素2型细胞因子阳性细胞的频率(开蓝圈) n =6；* P =0.0002)。 c T 0070907治疗前后ILC2s细胞培养上清液中2型细胞因子的测定 n =6；IL-13* P =0.048，IL-5* P =0.040)。 d PPARγ-RXRα结合基序(TOP)在IL-5和IL-13(人类基因组)启动子区的定位。生得最低的图案 p -FIMO工具的值(蓝色)或荷马软件的最高得分(橙色)显示。整合基因组观察器(IGV，v2.8.0)用来表示这些基序在IL-5和IL-13启动子中的位置。 84 。在……里面 b –c 每个符号代表一个单独的捐献者。数据以均值±扫描电镜显示，并进行双向方差分析.源数据作为源数据文件提供。
PPARγ抑制导致人ILC2s线粒体功能障碍 作为一种脂类传感器，pPARγ通过影响线粒体生物发生、葡萄糖摄取和脂质摄入等，在代谢调控中发挥着关键作用。 28 。为了进一步分析PPARγ介导的抑制ILC2s的机制，我们用MitoTrackGreen摄取法和MitoTracker深红色荧光法测定了这些细胞的线粒体质量。如图所示。 3A-d 经PPARγ抑制剂处理后ILC2s线粒体线粒体质量下降。我们还使用了四甲基罗丹明甲酯(TMRM)，通过在完整和活跃的线粒体中积累，可以评估其膜电位的变化。与MitoTracker结果一致的是，TMRM检测显示ILC2s与T 0070907孵育后线粒体电位显著降低。 3E，f )。为了证实我们的数据，我们进行了电子显微镜(EM)分析，显示T 0070907处理的ILC2s细胞线粒体体积百分比低于对照组(图1)。 3G，h )。这些发现表明T 0070907的抑制作用与线粒体功能的下降有关，而线粒体功能的下降又可能损害ILC 2细胞的适应能力。
图3：ILC2s中PPARγ的抑制导致线粒体功能障碍。 a , c , e MitoTracker Green流式细胞术分析的典型实例( a )MitoTracker深红( c )和TMRM( e )在未处理的ILC2s(灰度直方图)和T 0070907处理后(蓝色直方图)处理48h后，分别以平均荧光强度(MFI)进行量化。 b , d , f ILC2s未处理(开环)和T 0070907处理后(开放水圈)，( n =8；Mitotracker Green* P =0.0282，米托跟踪器深红色** P =0.0019，TMRM** P =0.0036)。具有代表性的电子显微镜图像(×4800放大率；刻度条：1μm)( g )和定量地块( h )未处理(开放环)和T 0070907处理(开放水环)48h( n =在一个独立实验中为每个实验条件检查40个细胞；* P =0.0307)。每个符号代表一个单独的捐献者或一个细胞。数据以平均±扫描电镜显示，用双尾Wilcoxon检验进行分析.源数据作为源数据文件提供。
肿瘤源性IL-33使ILC2s对产生IL-13敏感 在过去的十年中，alarmins被确认为参与癌症发展和进展的信号介质。 29 ,30 。特别是，不同的研究报道，IL-33及其受体st2在乳腺癌、肝细胞癌和结直肠癌(Crc)等不同类型癌症的发病中起着关键作用。 31 ,32 ,33 ,34 。我们以CRC为模型，探讨肿瘤源性IL-33在肿瘤免疫背景下对ILC 2功能的作用。首先，我们用组织微阵列技术证实了IL-33在人大肠癌组织中的表达。 4A )。GATA 3 + CD3 − 细胞在IL-33附近被识别。 + CRC上皮细胞，提示从这些恶性细胞释放的IL-33可能刺激人CRC病变中的ILC2s(如图所示)。 4B )。根据这些发现，我们观察到CRC患者血清中IL-33水平高于HDs(图1)。 4C )。其次，我们从细胞因子产生的角度，评估了大肠癌患者外周血单个核细胞(PBMC)和肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)中ILC 2的频率和功能。正如先前报道的那样，循环ILC 2的频率在HDs和CRC患者中是相当的(见图)。 4D )35 。重要的是，从分离的CRC组织的流式细胞仪分析来看，TIL中存在ILC2s(如图所示)。 4D )。在功能方面，CRC患者PBMCs产生的ILC2s比HDs PBMCs产生的ILC2s多(图1)。 4E，f )。为了进一步了解pPARγ在crc设置中ILC2s中的作用，我们评估了 PPARγ ，以及 CPT1A ，它是pPARγ的直接目标基因之一。 36 ，分别从大肠癌患者的PBMC和TIL中分离得到新分类的ILC2s。如附图所示。 3A，b ，高表达的趋势 PPARγ 和 CPT1A 在CRC患者PBMC中观察到与HDs相比，PPARγ不仅增加，而且在CRC环境下也更活跃。此外，T 0070907暴露于CRC患者的扩张ILC2s后，IL-13和IL-5分泌减少，线粒体功能受损，从而使HD ILC2s所观察到的效应再次出现。 3C-E )。这些结果表明，肿瘤患者的ILC2s更容易分泌细胞因子，这可能与他们在系统和肿瘤微环境中暴露于IL-33有关。
图4：来源于肿瘤的IL-33使ILC2s敏感，产生IL-13。 a IL-33的典型例子 + 人CRC组织中的肿瘤上皮(CRC组织芯片中88个染色核心中的一个)，标尺：600 m。 b 典型的CRC核心染色的IL 33和CD3(大插入)，放大的地区标志为黑方后，两种染色都进行了颜色反褶积和共配准(右插入)。标尺：大插入：100米小瓷砖：50米合并(大瓷砖)：25米。 c ELISA法检测大肠癌患者(开放紫罗兰环)和健康献血者(开放红环)血浆IL-33水平(HD) n =21，CRC患者 n =15；* P =0.0001)。 d 在HDPBMCs(开放红圈)、CRC患者PBMCs(开放紫罗兰环)和TILs(闭合紫罗兰环)中ILC2s的频率和绝对值方面的代表性例子和量化( n =10)。 e 流式细胞术分析HDPBMCs、CRC患者PBMCs或TIL中IL-13的典型例子。 f IL-13和IL-5在体外HD PBMCs(开放红环)、CRC患者PBMCs(开紫环)或TILs(闭合紫环)(HDs和CRC PBMC)中的表达频率 n =15，“儿童权利公约” n =12；IL-13 HD PBMCs与CRC PBMC* P =0.0144，IL-13 HD PBMCs与CRC TIL** P =0.0094，IL-5 HD PBMCs与CRC TIL** P =0.0044)。每个符号代表一个单独的捐献者。数据显示为平均值±扫描电镜(*)P < 0.05; **P < 0.01, ***P < 0.001) and were analyzed by Wilcoxon (c )，1( d )-或双向( f )方差分析。源数据作为源数据文件提供。
IL-13驱动ILC2s与癌细胞之间的串扰。 近年来，IL-13及其受体被认为是肿瘤治疗的新靶点，抑制IL-13产生细胞是实现这一目标的一种策略。 37 。为了更好地理解pPARγ、ILC2s和CRC细胞之间的串扰，我们用T 0070907或溶剂对照对ILC2s进行预处理，并与SW 1116细胞共培养。如图所示。 5A，b ，ILC2-SW 1116共培养可提高ILC2s的IL-13产量，而T 0070907预处理ILC2s可使IL-13的产量降低。ILC2s中IL-13的产生可能是由于IL-33在共培养的CRC细胞中的表达增加而引起的(如图所示)。 5C )。为了解决这一假设，我们使用已知通过干扰IL-33途径抑制2型免疫反应的寄生虫分泌蛋白(Hpari)进行了共培养实验。 38 。如附图所示。 4A 加入HpARI后，与SW 1116大肠癌细胞共培养后，ILC2s产生IL-13的量明显减少。由于IL-13通过影响上皮向间充质转化(EMT)参与大肠癌的进展和转移。 39 我们推测IL-2衍生的IL-13可能影响CRC细胞的EMT。为了解决这一问题，我们用活化的ILC2s的条件培养基(CM)进行了伤口愈合和克隆形成试验，无论是否与T 0070907预处理(分别为ILC 2和ILC 2+T 0070907)。未观察到对CRC细胞增殖的影响(附图)。 4B )。然而，我们发现IL C2 CM的存在促进了SW 1116细胞的迁移，而IL 2+T 0070907 CM的加入则产生了相反的作用(图1)。 5D，e )。同样，集落形成实验证实，与对照组相比，ILC2CM增加了SW 1116集落的数量，并与ILC 2+T 0070907CM相比，增加了SW 1116的数量。 5F )。此外，加入一种抗IL-13的阻断抗体可阻止SW 1116集落的形成，证实IL-13参与了IL 2-PPARγ对大肠癌细胞的依赖性作用(图1)。 5F )。为了证实ILC2CM对大肠癌转移和侵袭的促肿瘤作用，我们在SW 116细胞株中检测了细胞因子的表达。 MMP 9 和 N-钙粘素 ，两个与肿瘤细胞的进展和侵袭有关的分子。 40 ,41 ,42 。我们发现，加入ILC2CM显著增加了这两个EMT标记在CRC细胞上的表达，而加入ILC 2+T 0070907CM或抗IL-13阻断抗体则使其表达降低到基础水平(如图所示)。 5G )。综上所述，我们的数据表明癌细胞和ILC2s之间存在串扰，其中癌细胞触发ILC2s产生IL-13，进而维持其迁移和侵袭能力，但不影响其增殖速度。PPARγ在此回路中的抑制阻碍了ILC2s的促肿瘤作用。
图5：IL-13驱动ILC2s与癌细胞之间的串扰。 a 白细胞介素2衍生白细胞介素-13流式细胞术与SW 1116细胞共培养的典型例子。 b T 0070907与SW 1116 CRC细胞共培养时IL-13和IL-5阳性表达频率(中(开圆)+SW 1116(开放红圈)培养基+T 0070907+SW 1116(开蓝圆))(培养基) n =6，中等+SW 1116 n =8，中等+T 0070907+SW 1116 n =8；中等对中等+SW 1116* P =0.0313，中等+SW 1116 vs中型+T 0070907+SW 1116* P =0.0103)。 c 用qPCR方法检测IL-33在SW 1116 CRC细胞中的表达(SW 1116 CTR(开放圈)SW 1116+ILC 2(开放红圈)SW 1116+ILC 2+T 0070907(开放蓝圆))( n =3；* P =0.0419)。 d 创伤愈合实验的典型例子(×20放大；标尺：50m)，用SW 1116 CRC细胞(开圈)与ILC 2(开放红圈)或ILC 2+T 0070907条件培养液(CM)(开蓝圆)孵育。 e 24、48和72h愈合伤口面积的量化( n =5；** P =0.0078，* P =0.0493)。 f SW 1116 CRC细胞(开放红圈)、ILC 2+T 0070907 CM(开蓝环)或ILC 2 CM+抗IL-13阻断抗体(开放绿环)孵育14天后克隆形成的典型例子及定量分析(SW 1116 Ctrr) n =6，ILC2 CM和ILC 2+T 0070907 CM n =8，ILC2 CM+抗IL13 n =3；* P =0.0002，** P =0.0085，* P =0.0497)。 g 表达 MMP 9 (左)及 N-钙粘素 (右)用qPCR方法对SW 1116个CRC细胞(开放红圈)、ILC 2+T 0070907 CM(开放蓝圈)或ILC 2 CM+抗IL-13封闭抗体(开放绿环)(SW 1116 CTR、ILC2 CM、ILC 2+T 0070907 CM)进行鉴定。 n =6，ILC2 CM+抗IL13 n =5； MMP 9 SW 1116 CTR诉ILC2 CM** P =0.0035，ILC2 CM对ILC 2+T 0070907 CM* P =0.0425，ILC2CM对ILC2CM+抗IL13* P =0.0152； NCAD SW 1116 CTR诉ILC2 CM* P < 0.0001, ILC2 CM vs ILC2 + T0070907 CM **P =0.0041，ILC2CM对ILC2CM+抗IL13* P =0.0002)。每个符号代表一个单独的捐献者或样本。数据显示为平均值±扫描电镜，并进行了单次分析。c , f , g )或双向( b , e )方差分析。源数据作为源数据文件提供。
PPARγ在小鼠ILC2s中的表达和功能 为了将我们的发现转化为体内环境，我们评估了 PPARG C57BL/6小鼠肺组织中的ILC亚群。与我们的人类数据一致， PPARG 在ILC2s中特异表达，而在ILC1s和ILC3s中不能检测到(图1)。 6A )。因此，我们在体外将小鼠ILC2s暴露于T 0070907中，从而可以重复利用人ILC2s所获得的结果，同时降低IL-13和IL-5的产生(图1)。 6B，c )。接下来，为了确定pPARγ在ILC2s中的作用，我们使用了一种具有icc特异性pPARγ诱导基因敲除(Ko)的转基因小鼠模型。 PPARG fl/fl 小鼠在Id2启动子下表达CRE酶的动物，已知可控制ILC的发育 43 。该模型允许他莫昔芬以ILC特有的方式及时诱导cre活性。 44 (无花果) 6d )。我们下一次敏化 PPARG fl/fl ID2 克里尔 T2 阳性或阴性小鼠 PPARG fl/fl ID2 CRE + 和 PPARG fl/fl ID2 分别用IL-33和IL-25I.P。连续3d，注射他莫昔芬5天后。如图所示。 6E ，ILC2s从 PPARG fl/fl ID2 CRE + 与对照组相比，小鼠分泌的白细胞介素13和白细胞介素5显著减少。 PPARG fl/fl ID2 CRE − 老鼠。此外，与在人类中观察到的结果相似，我们发现动机部分匹配小鼠pPARγ-rxrα异二聚体结合基序在两者的启动子区域。 伊-5 和 伊-13 基因(图1. 6f ，补充数据 2 )。综上所述，这些结果证实了PPARγ在体内作为ILC 2功能的关键调节因子的作用。
图6：pPARγ在小鼠ILC2s中表达和功能。 a 表达 PPARG 应用qPCR技术对C57BL6小鼠肺组织中新分类的ILC亚群进行分析( n =3)。 b T 0070907处理小鼠白细胞介素-13的流式细胞分析代表例。 c IL-13及IL-5阳性ILC2s未治疗的频率(开放红圈)及T 0070907治疗后的频率(开放蓝圈)( n =4；* P =0.0101，** P =0.0015)。 d 表达 PPARG 白细胞介素33/白细胞介素25治疗后新鲜肺组织白细胞介素2的qPCR分析 PPARG fl/fl ID2 克里尔 T2 正(开蓝色圆)或Creer T2 阴性小鼠(开放红圈)( n =10，** P =0.0098)。 e IL-33和IL-25刺激小鼠ILC2s细胞培养上清液中IL-13和IL-5的检测 PPARG fl/fl ID2 克里尔 T2 正(开蓝色圆)或Creer T2 负老鼠(开红圈)( PPARG fl/fl ID2 克里尔 T2 负 n =11， PPARG fl/fl ID2 克里尔 T2 阳性 n =14；IL-13** P =0.0086，IL-5** P =0.0035)。 f PPARγ-RXRα结合基序(TOP)在IL-5和IL-13(小鼠基因组)启动子区的动机定位。动机与最低的原始p值发现FIMO工具(蓝色)或最高的得分发现荷马软件(橙色)。整合基因组观察器(IGV，v2.8.0)用来表示这些基序在IL-5和IL-13启动子中的位置。 84 。见补充数据 2 完整的主题搜索结果。每个符号代表一个单独的鼠标。数据显示为平均值±扫描电镜，并进行了Wilcoxon分析。d )或双向( c , e )方差分析。源数据作为源数据文件提供。
ILC2s中PPARγ的表达对CRC小鼠肿瘤进展的影响 接下来，为了研究白细胞介素2(ILC2s)在大肠癌发生、发展中的作用，我们采用了小鼠异位性CRC模型。 罗尔 a Fl/sg Il7r CRE小鼠(称为ILC2KO小鼠) 45 。我们皮下注射(S.C.)MC-38小鼠基因修饰的CRC细胞构成性产生IL-33(报告为MC-38-IL33)。将肿瘤细胞注射到ILC2KO的右侧，观察其存活情况。如图所示。 7A 与对照组相比，ILC2KO小鼠的肿瘤进展较慢，在KO株中具有较好的生存优势，提示ILC2s在该模型中具有促肿瘤作用。这种效应在从C57BL6小鼠肺中分离的扩张的ILC2s过继转移后恢复(见图)。 7b )。接下来，为了进一步评估pPARγ在肿瘤发生过程中对白细胞介素2的贡献，我们将mc-38-IL 33细胞注射到 PPARG fl/fl ID2 CRE + 老鼠和 PPARG fl/fl ID2 CRE − 老鼠(图1. 7C )。引人注目的是，18天后，肿瘤体积减少。 PPARG fl/fl ID2 CRE + 小鼠与对照组比较(图1)。 7D )。根据这些数据， PPARG fl/fl ID2 CRE + 与对照组相比，小鼠的存活时间更长(如图所示)。 7E )。为了证实ILC2s参与EMT现象的体外实验结果，我们采用qPCR方法检测了小鼠MMP-9和N-cadherin在游离肿瘤组织中的表达。如图所示。 7F ，两者的高表达 MMP 9 和 Ncad 在……里面 PPARG fl/fl ID2 CRE − 相比较 PPARG fl/fl ID2 CRE + 观察肿瘤。此外，为了评价PPARγ抑制在大肠癌发生和进展中的治疗作用，我们用T 0070907对荷瘤小鼠进行了治疗。如附图所示。 6A T 0070907可显著降低肿瘤体积和重量，提示在CRC患者中应用PPARγ抑制剂是一种可能的治疗方法。此外，我们还通过抗IL-13中和抗体治疗荷瘤小鼠，评价了IL-13在体内的促肿瘤作用。治疗18天后，与对照组相比，治疗后小鼠的肿瘤体积和重量均显著减少(补充图)。 6B )。综上所述，这些结果强调了ILC2s和PPARγ在促进癌细胞进展和随后转移潜能方面的相关性。
图7：pPARγ在大肠癌小鼠模型中的表达影响肿瘤的进展。 a 肿瘤存活 罗尔 a Fl/sg Il7r Mc-38-IL 33鼠CRC细胞移植后CRE阳性(蓝巴)或阴性(红巴)小鼠 n =6，ILC2 KO n =7；* P =0.0227)。 b 以肿瘤体积表示的肿瘤大小(左)和肿瘤发育(右)在ILC2WT(开放红圈)、ILC2KO(开放蓝圈)和ILC2KO小鼠ILC2-转移(开放绿色圆圈)中表现为肿瘤体积。 n =6；* P =0.0473，** P =0.0023)。 c CRC小鼠模型的图式表示 PPARG fl/fl ID2 克里尔 T2 老鼠。 d 肿瘤发育表现为肿瘤体积 PPARG fl/fl ID2 克里尔 T2 阳性(开蓝圈)或负鼠(开红圈)( n =15；* P =0.0451)。 e 生存 PPARG fl/fl ID2 克里尔 T2 阳性(蓝棒)或阴性(红棒)荷瘤小鼠( n =5；* P =0.0338)。 f 表达 MMP 9 (左)及 Ncad (右) PPARG fl/fl ID2 克里尔 T2 阳性(开放蓝色圆)或阴性(开放红色圆)分离的肿瘤组织( n =8； MMP 9 *P =0.0379， Ncad *P=0.0104)。每个符号代表一个单独的鼠标或示例。数据以平均±扫描电镜显示，用对数秩(Mantel&Cox)进行分析。a , e )Wilcoxon( f )或双向( b , d )方差分析。源数据作为源数据文件提供。
