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抗体基因表达载体的构建

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发表时间:2019-08-07 12:25作者:武汉新启迪Xinqidi来源:http://www.qidibio.com

抗体基因表达载体的构建

为了能运载Ig基因,并得以在持续稳定转染的相容细胞中分泌表达,必须构建相应的真核表达载体质粒,这种质粒须具备如下特点:①具备完整的真核转录单位,可以整合到宿主细胞染色体中,并表达或能自行复制其DNA;②因为只有约103106的真核细胞被转染,因此要从中筛选出被转染的阳性表达细胞,所以该质粒应具备选择性基因标记,其基因产物可在选择性培养基中进行鉴别;③其DNA片段容易被修饰,可进行适宜的插入或剪接;④内含适宜的限制酶的酶切位点,使适宜的DNA片段容易克隆。根据表达时选用的受体细胞类型,可构建各自相应的载体。为生产出具有功能活性的新型抗体分子,需将编码轻、重链的H和L基因同时导入受体细胞,并使之等量(或接近等量)地表达和装配。目前采用了两种方法:①分别构建表达H基因和L基因的载体,并用两个载体同时转染受体细胞,该法便于遗传学操作,但只有两种载体同时转染成功并产生等量轻、重链时,才能有效地装配成功能性抗体,因此两种载体应载有不同的抗性基因(多采用neo基因-转染的细胞表现为G418抗性和gpt基因转染的细胞表现为霉酚酸mycophenolic acid抗性),并同时使用两种制剂做双重抗性筛选;②将轻、重链基因插入同一载体,该法利于筛选,但插入的基因序列过长,给基因操作带来一定的困难。抗体结构较复杂,与其他单链蛋白或多肽(如细胞因子等)相比,高效表达功能性抗体分子尚有很大困难。目前,许多学者主要是利用哺乳类动物非淋巴细胞,导入用质粒重组的目的基因,表达后,制备基因工程抗体,这是目前制备这类抗体的主要方法。


文章分类: 分子技术资料
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