炎症巨噬细胞中白细胞介素-10对Arg 2有正调节作用。
我们首先鉴定了这个基因Arg 2当研究炎症巨噬细胞在IL-10/miR-155轴交界处的调节时。采用基因芯片技术检测了野生型小鼠骨髓源性巨噬细胞(Bmdm)与LPS+IL-10(抗炎)刺激后的基因表达变化。MiR 155−/−BMDM受LPS刺激，米尔-155−/−(预测抗炎)(如图所示)。1A和补充图。1A)。旋转基因集富集分析(Romer)表明，这个轴上的基因比例最高的是代谢途径(补充图)。1B)。特别是，Arg 2在WT(LPS+IL-10)和米尔-155−/−(LP)群(图1)。1B)，是唯一在其3‘UTR中与miR-155结合位点的基因(如图所示)。1B和补充图。1C)21。我们确认Arg 2用荧光素酶法检测巨噬细胞中miR-155的靶点，Arg 23‘UTR活性在miR-155模拟物存在时被显著抑制，而在抗肿瘤药物存在时则呈反作用增强(图1)。1C)。重要的是，Arg 2蛋白水平在米尔-155−/−(LPS+IL-10)与米尔-155+/+(LPS+IL-10)，而Arg 1在基因型间的表达是一致的(图)。1D).
图1：在炎症巨噬细胞中，精氨酸酶-2受IL-10/miR-155轴的调节.巨噬细胞(bmdm、来源264.7或thp-1)未经LPS、LPS+IL-10或IL-10单独刺激24 h。a微阵列设计原理图。Wt(LPS)、BMDM(炎症)、WT(LPS+IL-10)、BMDM(抗炎)或米尔-155−/−(LPS)BMDM，(预测抗炎)。b说明测井褶皱变化的Ma图米尔-155−/−LPS和WT(LPS+IL-10)激活的巨噬细胞具有共同的上调(红色)和下调(蓝色)基因。还显示了巨噬细胞中常见的炎症和抗炎基因。c荧光素酶活性测定Arg 23‘UTR报告为相对光单位(Rlu)在存在或不存在miR-155模拟或抑制剂在原始264.7细胞(n=3项独立实验)。非靶向控制(NC)模拟或抑制剂被报道为参考，并设定为100%.dArg 2和Arg 1蛋白水平米尔-155+/+和米尔-155−/−BMDM代表.n=3个生物复制体。eRT-PCR分析Arg 2和Arg 1BMDM中mRNA的表达n=3个生物复制体)。通过将数据规范化为M18s并分析相对褶皱变化对非受刺激对照的影响。fBMDM中Arg 2和Arg 1蛋白的表达水平。代表(至少)n=5项生物独立实验。gRT-PCR分析Arg 2THP-1细胞的mRNA水平n=3项独立实验。数据点表示每个独立实验的技术三倍的平均值)。数据通过标准化来进行比较M18s，并与未受刺激的对照组比较，分析其相对皱褶变化。h–jArg 2和Arg 1蛋白水平(代表n=3项独立生物实验)hTHP-1细胞iBMDM在有或没有抗IL-10Ra(抗IL-10R)抗体的情况下，j IL 10+/+和IL 10−/−BMDMk, l尿素对精氨酸酶活性的影响：k野生型BMDM(n=6个生物复制)，以及l Arg 2+/+VSArg 2−/−BMDM(n=3个生物复制体)。c, e, g, k, l所显示的数据是平均的，误差条代表±SEM。数据分析c普通的单向方差，以及e, l双向方差，其次是c, e图基和l西达克的多重比较后特别测试。g, k双尾双尾法比较LPS与LPS+IL-10的数据t-测试。P-数值显示在图表上，以便进行统计上的显着比较。
虽然大家都知道IL-10能诱导arg 1。10,13,22，只有一种推测表明，IL-10介导了炎症巨噬细胞中Arg 2的增加。10。在此，我们通过验证外源性IL-10在LPS处理的小鼠和人巨噬细胞中对Arg 2的上调，在mRNA和蛋白水平上与LPS或IL-10单独处理的细胞相比，显著扩展了这些研究。1E-H和补充图。1D)。相反，Arg 1只在小鼠巨噬细胞中被LPS+IL-10协同上调。氢和补充图。1D)。IL-10Rα阻断抗体可降低脂多糖介导的Arg 2的诱导作用，证实了IL-10对Arg 2表达的依赖性(如图1所示)。1I)和IL 10−/−BMDM受LPS刺激。1J)。此外，外源性IL-10在LPS中的加入也刺激了LPS的产生。IL 10−/−BMDM恢复了Arg 2的表达。1J)。另外，在STAT 3抑制剂STATTIC处理的BMDM中，Arg2mRNA和蛋白水平明显降低(补充图)。1E-g).
我们接下来通过测定LPS、LPS+IL-10和IL-10刺激的BMDM中的副产物尿素来研究精氨酸酶的催化活性(L-精氨酸转化为L-鸟氨酸)。第一，在WT，BMDM，LPS处理增加尿素的产生，但在LPS+IL-10处理的细胞中加入IL-10，这一作用显著增强。1K)，一种失去的效果IL 10−/−补充图氢)。PAN精氨酸酶抑制剂NOR-NOHA对精氨酸酶催化活性的药理抑制作用证实了这两种异构体对LPS+IL-10刺激细胞中精氨酸酶活性的依赖性(补充图1)。1I，j)。此外，为了确定Arg 1和Arg 2的相对贡献，我们使用了针对每个异构体的siRNAs(补充图)。1K，l)，并说明LPS+IL-10处理的巨噬细胞在产生尿素时对这两种亚型的依赖(补充图)。1M). Arg 1−/−小鼠在出生后约2周死亡，阻碍了BMDM的收获能力。23。然而，我们证实了Arg 2对精氨酸代谢的贡献。Arg 2−/−BMDM的尿素产量大幅度下降Arg 2−/−(LPS+IL-10)细胞。1L)。同时也检测到NO水平的增加(补充图)。1N)，提示Arg 2的缺乏可能提高L-精氨酸对iNOS的有效性。
Arg 2定位于线粒体。
为了进一步确定精氨酸酶异构体的独立作用，我们着重于以下事实：Arg 2包含线粒体靶向序列(Mts)。24。虽然这推断了线粒体的本构定位，但这还没有在巨噬细胞中得到彻底的验证。25并在内皮细胞中观察到细胞液的易位。26表明Arg2定位是一个受不同条件影响的动态过程。在这里，我们明确说明线粒体Arg 2在巨噬细胞中的定位，并更具体地评估IL-10对此过程的影响。与Arg 1相比，我们首次发现Arg 2定位于线粒体，利用体外转录/翻译(IVTT)系统(图1)。2A)。Arg1(pCMV-Arg1)和Arg2(pCMV-Arg2)在60 min的高表达质粒显示Arg2被大量导入线粒体。然而，Arg 1的情况并非如此(图1)。2A比较2-4号和7-9号车道)。此外，在线粒体膜去极化后，Arg 2通过加入fcp(通道10)而保持进口，这可能表明arg 2定位于线粒体内膜(Imm)，因为针对线粒体基质的蛋白质需要膜电位才能穿过imm。27,28。然而，今后的研究需要确认这一本土化的真正性质。
图2：精氨酸酶-2调节炎症巨噬细胞对IL-10反应的线粒体动力学.aIVTT法测定pCMV-Arg1和pCMV-Arg2的线粒体导入量。凝胶暴露在荧光粉现场检测进口蛋白。将完整IVTT蛋白的1μ1作为输入对照(通道1和6)。时间历程超过60分钟，显示代表与线粒体膜结合和发现的蛋白质的条带。FCCP被用作去极化控制。以三个实验为代表的X线片并行运行和处理。图通过测量相对表达式对集合实验的密度进行了分析。bArg 1和Arg 2在分馏中的免疫印迹IL 10–/–未受刺激的BMDM(CTL)，或仅用LPS、LPS+IL-10或IL-10单独刺激的BMDM。VdA和β-微管蛋白分别作为线粒体和细胞质的对照.三个独立实验的代表。cImageStream显示未受刺激(CTL)或LPS或LPS+IL-10刺激的BMDM中Tom20和Arg2的共定位水平。(左)代表图片显示的~1000个事件。显示的通道是亮场(Ch01)、Tom20(绿色/Ch02)、Arg 2(红色/Ch11)和一个合并。原始放大倍数，×60。(右)在两个独立的生物学实验中，显示了Tom20和Arg2在不同处理中的共定位指数。每个数据点表示大约1000幅处理图像的中值索引。d–fBMDM要么不受刺激(CTL)，要么单独用LPS、LPS+IL-10或IL-10刺激，然后用MitoTracker Red-CMXRos染色。共聚焦显微镜观察线粒体形态。较低的面板显示了图像在白色方格内的更高放大率。箭头显示线粒体融合和分裂。图表显示线粒体形态学分析的结果n=3项独立生物学实验。标尺代表5m。d野生型BMDM，e用DMSO或NOR-NOHA和f Arg 2+/+和Arg 2–/–BMDMa, d–f用误差条显示的数据表示±SEM。d–f采用双向方差分析和Tukey后特设检验进行多重比较，确定统计学意义。P-在延长的线粒体组分之间有显着意义的图表上表示值。
接下来，我们想确定我们的刺激是否导致arg 2在线粒体上或从线粒体中易位(如先前报道的内皮细胞对oxldl的反应)。26)。经bmdm细胞分馏证实，arg 2在bmdm中对lps+IL-10的反应是在线粒体内被定位和上调的。IL 10–/–BMDM(图1.2B)。Arg 1的情况并非如此，它只在不同处理的胞质组分中检测到(如图所示)。2B)。此外，使用ImageStreamTM流式细胞术显示Arg 2主要以线粒体蛋白Tom20表达和定位，尤其是在LPS+IL-10刺激细胞中。2C)。定量分析显示，静止细胞中Tom20/Arg 2的共定位率为44.6%(附图)。2A)，LPS+IL-10处理BMDM后，这一比例提高到60%(补充图)。2A)。此外，在LPS+IL-10处理的264.7巨噬细胞中，还可检测到Arg 2在线粒体上的表达和定位。2B).
Arg 2调节线粒体动力学
鉴于Arg 2在LPS+IL-10细胞线粒体中的大量表达，我们决定在实验条件下观察线粒体的形态学和动力学。线粒体功能与它们的塑性结构密切相关，而塑性结构会根据细胞的需要不断变化。2929,30,31，以线粒体(≤1μm)为代表。相反，线粒体拉长的“融合”状态(≥3μm)有利于线粒体呼吸和存活。32。线粒体动力学分析显示，仅LPS刺激的细胞与对照组相比，线粒体分裂明显增加(≤1μm~(-1))。CTL：16%；LPS：85%)。二维空间)。但值得注意的是，这种裂变状态不仅在LPS+IL-10(≤1μm.线粒体以融合状态为主(≥3μm~(-1))。LPS：10%；LPS+IL-10：64%)。二维空间)。接下来，我们研究了精氨酸酶的活性是否是这种形态效应的必要条件。线粒体融合明显减少(≥3μm~(-1))。(22%)LPS+IL-10处理BMDM，NOR-NOHA预处理后BMDM的表达率为22%.(无花果)2E和补充图。2C)。更重要的是，我们展示了Arg 2–/–(LPS+IL-10)细胞(≥3μm.)(18%)线粒体融合水平明显低于Arg 2+/+(LPS+IL-10)细胞(≥3μm.)64%)2F和补充图。二维空间).
Arg 2增强巨噬细胞线粒体呼吸
IL-10已被证明影响线粒体的特征和相关的功能，如质量，膜电位(ΔΨ)。m)和氧化磷酸化(OxPhos)19。鉴于Arg 2对线粒体动力学的影响，我们研究了Arg 2在IL-10驱动的线粒体功能中可能发挥的作用。我们首先用流式细胞仪证明Arg 2–/–BMDM的整体细胞大小和细胞内复杂性与Arg 2+/+(补充图。2E，f)。此外，我们发现在所有实验条件下，各基因型之间的线粒体质量没有变化(补充图)。2G)。然而，我们观察到膜电位，ΔΨm，在.Arg 2–/–(LPS+IL-10)细胞与Arg 2+/+(LPS+IL-10)(附图)2H)。由于膜电位是线粒体ATP合成的驱动力，这一发现导致我们研究了Arg 2对OxPhos的影响。LPS刺激的巨噬细胞减少了他们对OxPhos作为一种能量生产手段的承诺。33而外源性IL-10则能促进LPS刺激的OxPhos。IL 10–/–巨噬细胞19。当然，我们验证了外源IL-10显着恢复OxPhos的能力。IL 10–/–BMDM经LPS处理，表现为基础氧消耗率(OCR)、最大呼吸能力(MRC)和氧诱导ATP生成(补充图)。3A，b)。然而，用sirna处理的264.7巨噬细胞中，IL-10对这些参数的恢复作用明显减弱。Arg 2(SiArg 2)与非目标对照(SINT)比较(补充图2)。3C)。这一发现在siRNA处理的iBMDM中被重新描述(见图)。3A，b和补充图。三维空间)，并在Arg 2–/–(LPS+IL-10)BMDM(图1)3C，d).
图3：精氨酸酶-2增强炎症巨噬细胞氧化磷酸化。a–h, j, k分别加入寡霉素(1M)、FCCP(0.9M)和鱼藤酮+抗霉素A(ROT/Ant A)(0.5mol)，实时测定氧耗率(OCR)。a(左)未受刺激的Sint和siArg 2永生化BMDM(IBMDM)细胞和(右)LPS和/或LPS+IL-10对Sint和si的作用Arg 2IBMDM(代表n=2个生物实验)。b, d, f, h, k定量变化的基础氧消耗率(基础OCR)，最大呼吸能力(MRC)，和OXPHOS诱导的ATP水平。bLPS和LPS+IL-10处理转染Sint或si的iBMDM细胞Arg 2。所显示的数据点是两个独立实验的15-20个技术复制。c Arg 2–/–BMDM(跟踪代表n=3个生物重复序列)。dLPS/LPS+IL-10刺激后氧化参数的定量变化Arg 2–/–BMDM(n=3项生物学实验)。e IL 10–/–BMDM(左)未受刺激，或(右)LPS/LPS+IL-10受刺激(n=3项生物学实验)。细胞经DMSO或150μM NOR-NOHA预处理后1h，再加入IL-10和/或LPS刺激。f数量变化IL 10–/–DMSO或NOR-NOHA预处理BMDMS对LPS+IL-10细胞的氧化参数影响.数据点是生物复制(n=3)。gRaw264.7巨噬细胞表达pCMV-EV、pCMV-Arg1或pCMV-Arg2。三个独立实验的痕迹代表。h转染过表达质粒的Raw264.7细胞氧化定量参数的变化g)。数据点是三个独立的实验(n=3)。i–k原264.7巨噬细胞表达pCMV-EV、pCMV-Arg2或催化死亡突变体pCMV-H145F。i精氨酸酶活性测定。数据点显示了三个独立的实验。j线粒体OCR示踪是两个独立实验的代表。kArg2vsH145F OCR参数。数据点显示，从两个独立的实验中收集了15-20个技术复制。a–k所有痕迹和散点图的数据均为平均值±扫描电镜。d, f, h每个生物或独立数据点都有10-20个技术复制。用双尾学生的数据分析了数据的统计意义。t-测试，以及b, I, k使用普通的单因素方差分析与图基的后特别检验进行多重比较。各别p-数值显示在图表上，其结果具有统计学意义。
其次，我们研究了该工艺对精氨酸酶催化活性的要求，发现在此过程中，基本的ocr和mrc明显减弱。IL 10–/–(LPS+IL-10)细胞经NOR-NOHA预处理后，氧磷诱导的ATP降低(图1)。3E，f)。与bmdm相似，NO-NOHA(补充图)预处理后的264.7巨噬细胞中的OxPhos明显下调.3E)。为了了解Arg 1与Arg 2在OxPhos上的相对贡献，我们通过免疫印迹分析证实了Arg 1与Arg 2在原264.7中的原位氧化呼吸参数。3F)。线粒体呼吸实验结果表明，pCMV-Arg2对OxPhos有明显的促进作用。第三代)，如增加的OCR参数所示。3H)。而pCMV-Arg1与空载体pCMV-EV无明显差异。3g和h34至苯丙氨酸(H145F)。精氨酸酶分析证实了H145F突变体的催化失活。3I)，免疫印迹显示pCMV-Arg2与野生型pCMV-Arg2具有相似的表达。(补充图。第三代)。随后，我们证明Arg 2的催化位点在其对OxPhos的调控中起着重要的作用。3J由于与pCMV-Arg2相比，H145F突变体中OXPHOS的所有参数均被下调。3K)。总的来说，这是Arg 2亚型影响免疫细胞型氧化机制的第一次报告。
Arg 2提高琥珀酸脱氢酶/复合物II活性
在确定Arg 2促进线粒体氧化代谢后，我们想要解开这个过程的细节，因此，我们展望了TCA循环等等。首先，利用气相色谱-串联质谱(GC-MS)研究了IL-10对TCA循环代谢产物的影响。我们观察到，与对照组相比，LPS+IL-10线粒体野生型bmdm微丸的富马酸和苹果酸水平显著升高(补充图)。4A)酶琥珀酸脱氢酶(SDH)下游的两个代谢产物。另一项研究证实了这一点，研究表明富马酸和苹果酸含量显著下降。IL 10–/–Bmdm对lps的响应，与野生类型的bmdm相比较。18.
SDH是一种双功能酶，在TCA循环中起着核心作用，在ETC中也起着复合物II(CII)的作用。为了研究内皮细胞在正常结构环境下的功能，我们通过测定谷氨酸和苹果酸盐(CI)和琥珀酸盐(CII)处理后渗透细胞的耗氧率(OCR)来检测单个复合物的活性。35。CI和CII在LPS+IL-10BMDM中的OCR较未受刺激或LPS刺激的细胞显著升高(图一)。4A)。IL-10可能在复杂的活动中起作用。IL 10–/–在静息过程中检测到明显降低CI和CII活性的BMDM。IL 10–/–细胞与野生型对照(补充图)。4B)。接下来，在这种情况下检查Arg 2的任何影响是很重要的。有趣的是，在静止状态下，只检测到特定于ci的ocr显著下降。Arg 2–/–相比较Arg 2+/+BMDM，而CI特异性OCR在基因型间具有可比性。4B)。此外，外源性IL-10的加入也不能促进CII特异性OCR的产生。Arg 2–/–(LPS+IL-10)细胞比较(见图)。4C)。我们还观察到，当比较LPS+IL-10处理Arg 2纯合子时，有显著的基因剂量效应。Arg 2+/+)、杂合子(Arg 2+/–)和缺陷(Arg 2–/–)BMDM(图1.4D)。相反，Arg 2在264.7巨噬细胞中的过表达促进了CII依赖的OCR(如图所示).4E)。这在表达H145F催化突变体的细胞中明显减弱，表明Arg 2的催化活性在这一过程中的重要性。重要的是，我们证实Arg 1的过表达对空载体(pCMV-EV)控制的CII活性没有显著影响。4E).
图4：精氨酸酶-2影响复合物Ⅱ的活性，调节IL-1β的分泌.a–eXFe96例未处理(CTL)BMDM或刺激细胞(LPS或LPS+IL-10作用24h)复合物I和(或)复合物Ⅱ特异性OCR的比较。加入衬底后，氧耗率百分比(OCR%)增加的数据：a野生型细胞。n=3(复数I)和n=7(复合体II)生物复制。b静止野生型(Arg 2+/+)与Arg 2–/–, cCTL vs刺激Arg 2–/–, dLPS+IL-10刺激Arg 2+/+, Arg 2+/–，和Arg 2–/–; b–d显示的数据是生物的n=3。e复合物II特异性OCR在原264.7过表达pCMV-Sport6质粒的EV(空载体)，Arg 2，H145F和Arg 1。数据显示，在两个独立的实验中，20个技术复制(H145F和Arg1)和40个技术复制(EV和Arg2)。f四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞SDH活性Arg 2+/+和Arg 2–/–BMDMSDH抑制剂二甲基丙二酸(DMM)作为对照(n=3个生物复制体)。g用紫外-可见分光光度法测定阿格2+/+和Arg 2–/–BMDM以柠檬酸合成酶(CS)为对照。n=3项生物三重)，h–l野生型比较(Arg 2+/+)和Arg 2–/–级别的BMDMh琥珀酸盐i富马酸盐j线粒体活性氧(MtROS)，kHif-1α、Arg 2、Arg 1和β-tubulin的蛋白表达(作为负载对照)；lIL-1β酶联免疫吸附试验(ELISA)比较上清液分泌水平。h–j, l n=3个生物复制，和k代表.n=3项独立实验；m, n Arg 2+/+和Arg 2–/–C57BL/6J小鼠腹腔注射LPS 10 mg/kg，持续8h：m(左)脾Hif-1α，Arg 2，β-tubulin。6只野生型小鼠和6只野生型小鼠的杂交代表Arg 2–/–。(右)密度分析显示Hif-1α的相对表达水平(n=6)；n腹腔灌洗液中IL-1β、IL-10和IL-6分泌水平n=6个生物复制体)。a–j, l–n散点图的数据为均值±扫描电镜。数据分析a–g, l普通的单向方差与图基的多重比较，h, j, n双尾t-用韦尔奇的修正进行测试，以及I, m双尾配对t-测试。无论是什么重要的，准确的p-数值按数字计算。
为了充分验证我们关于arg 2和cii活性的发现，我们还测量了mtd对formazan的还原作用，这是SDH活性的一种常见测定方法。36，这表明Arg 2–/–BMDMs在静息状态和LPS+IL-10治疗条件下SDH活性均明显降低(图二)。4F)。无差异Arg 2+/+和Arg 2–/–4F)。类似于我们的通量分析器实验，在264.7巨噬细胞中Arg 2的过表达促进了CII的活性，在H145F的表达细胞中，这一作用明显减弱(补充图)。4C)。最后，我们使用单波长分光光度计技术询问cii的特异性活性，并将其表达为柠檬酸合酶(Cs)的比活性，以使线粒体质量的活动正常化，如前所述。37。结果表明，静息时CII活性明显降低。阿格2–/–BMDM与Arg 2+/+控件(图1.4G)。此外，外源性IL-10能显著恢复cii的特异性活性。Arg 2+/+(LPS+IL-10)细胞Arg 2+/+(有限责任公司)。然而，IL-10恢复ci特定活动的能力在Arg 2–/–(LPS+IL-10)BMDM(图1)4G)。在LPS+IL-10中检测细胞琥珀酸和富马酸时，证实了arg 2在cii特异性活性中的作用。Arg 2–/–BMDM与野生型控件相比。在这里，我们证明了IL-10减少了整体琥珀酸盐(图1)。4H与单纯LPS相比，LPS+IL-10刺激BMDM的富马酸水平升高(图二)。4I)。这种效果又一次消失了。Arg 2–/–(LPS+IL-10)BMDM(图1)4H-I).
急性炎症过程中Arg 2对HIF-1α和IL-1β的调节作用
在tca循环中，LPS刺激的断裂和异常等活动的机制被广泛认为是炎症性的。38。在这种情况下，研究报告说，由于直接产生线粒体活性氧(MtROS)，炎症表型增加。这与hif-1α的稳定、细胞因子IL-1β的增加以及抗氧化反应的降低密切相关。2,39。我们发现mtros在Arg 2–/–(LP+IL-10)BMDM与Arg 2+/+(LPS+IL-10)(图1)。4J)伴随着HIF-1α蛋白水平的升高。Arg 2–/–(无花果)4K)。重要的是，在我们的条件下检测IL-1β水平，显示IL-10对IL-1β的抑制作用。Arg 2+/+(lps+IL-10)细胞在Arg 2–/–(LPS+IL-10)(图1)。4L)。值得注意的是，肿瘤坏死因子(TNF)和白细胞介素-6(IL-6)水平在两组间Arg 2+/+(LP+IL-10)及Arg 2–/–(LPS+IL-10)(附图)4D)。此外，还检测到nrf 2水平下降，这是一种已知的诱导抗氧化基因表达的转录因子。Arg 2–/–细胞跨处理(补充图。4E).
提示IL-10通过线粒体的Arg 2介导其抗炎作用对IL-1β的产生起调节作用。接下来，我们研究了arg 2在IL-10受到体内LPS攻击时是否受到限制。IL 10+/+和IL 10–/–老鼠。腹腔灌洗液中肿瘤坏死因子、白细胞介素-6和白细胞介素-1β蛋白水平明显升高。IL 10–/–(补充图。4F)。有趣的是，Arg 2MRNA水平显著降低IL 10–/–补充图4G)从脾脏取出来的组织中缺少Arg 2蛋白。IL 10–/–无蛋白表达变化，可见于Arg 1(补充图1)。4H)。最后，我们检测了在体内的LPS攻击后的反应。Arg 2+/+和Arg 2–/–老鼠。我们观察到，与我们在原代bmdm中的体外实验结果相比较，hdf-1α在小鼠脾脏中的表达明显增强。Arg 2–/–老鼠(图1.4m)。此外，即使白细胞介素-10分泌显著增加Arg 2–/–小鼠腹腔灌洗后，IL-1β分泌水平在这些小鼠中仍显着高于野生型小鼠(图一)。4N)。有趣的是，这一结果在siRNA基因敲除后在体外得到了反映。Arg 2在LPS+IL-10处理的iBMDM(补充图)。4I)。这些结果共同表明，在缺乏Arg 2的情况下，IL-10对IL-1β的抑制作用消失。
