您好,请问有什么可以帮到您的。 点击这里给我发消息
武汉新启迪生物科技有限公司
新启迪-您的生物科研好伙伴!
本企业通过iso9001质量体系认证

百里香酚补充、灭活沙门氏菌和慢性热应激对日本鹌鹑代表免疫指标的影响

 二维码
发表时间:2020-10-26 15:23作者:武汉新启迪Xinqidibio

摘要

环境挑战被整合在神经内分泌相互作用中,影响被挑战个体的免疫系统,并可能对后代产生跨代影响。本研究探讨了日粮中添加百里香酚是否能调节成年日本鹌鹑同时接触灭活疫苗时的免疫应答。沙门氏菌肠病和慢性热应激(CHS)。我们还评估了成人经历的情况是否会影响他们未受干扰的后代的免疫反应。在亲代,CHS暴露的鹌鹑的炎症反应和异嗜细胞/淋巴细胞(H/L)比值均高于未添加CHS的鹌鹑。在其后代中,父母接触CHS的雏鸡表现出更高的炎症反应和较低的抗体生成。在H/L比方面,添加亲本的雏鸡的H/L比值较低。日粮中添加百里酚部分正调节炎症反应,避免了高温环境下亲代H/L比值的改变,说明这些成虫在应对这一挑战方面有较好的效果。后代的较低的H/L比值表明,雏鸡更有能力处理与传统繁殖条件相关的潜在压力情况。

导言

在脊椎动物中,许多环境挑战在生理上被整合在神经内分泌(InE)的相互作用中。1,2。一旦这种相互作用被激活,中介物(如激素或细胞因子)就会释放出来,以应对这些挑战。在鸟类物种中,高温和对潜在有害微生物的阐述也被认为是上述相互作用的环境挑战,对其组成部分之一免疫系统产生重大后果。3,4,5。这些环境挑战对两性都有不同的影响,因为男性比女性更容易受到影响。6,7。然而,由此产生的生理反应总是需要资源来重建稳态条件。8,9对鸟类健康状况和福利的影响3,10,11。如果鸟类的生理可能性是有限的,这些对生物体的影响可能取决于资源的不同分配,优先考虑生存或繁殖,但对其他系统有负面影响。9,12,13导致生理权衡的表现。

在夏季,特别是在热带和亚热带国家,白天记录的温度高于最佳温度。在许多情况下,这种情况会持续数天。14,15导致一种被描述为慢性热应激(CHS)的现象。高环境温度的暴露对家禽的生理产生重大影响,降低了家禽的生长速度和增重,这与鸟类在热应激条件下的摄取量减少有关。14,16。另一方面,家禽物种遇到免疫挑战,例如沙门氏菌爵士。肠化或大肠杆菌,对体重和饲料转化率也有影响。17,18。此外,潜在有害微生物(即:沙门氏菌)已被报道不断挑战鸟类的免疫系统19,20,21。以前的报告指出,不断升高的环境温度和高水平的病原体挑战会对免疫系统的不同组成部分产生有害影响。例如,白细胞结构的改变22、肠道形态及其微生物区系23,增加异嗜细胞/淋巴细胞比率(H/L),减少炎症反应11,24,巨噬细胞活性25抗体介导的反应22,25,26已被报道为家禽种类。

营养也被认为是一种潜在的环境免疫调节剂。不同程度的食物剥夺会增加皮质酮浓度、与炎症相关的细胞因子和H/L比值。27,28。相反,膳食补充剂,如益生菌、益生菌或植物化学物质,能够积极地调节免疫系统。在我们的研究中,我们使用了麝香草酚,牛至精油的主要成分之一。该成分已被纳入家禽的饮食中,作为食物补充,改善体重增加,脂肪酸的氧化稳定性,减少恐惧相关的行为,但对鸟类的活动没有显著的影响。29,30,31,32。考虑到免疫系统的影响,有报道说百里香酚能增加对植物素-p(PHA-P)的炎症反应。33,与其异构体卡伐罗尔一起,提高抗绵羊红细胞抗体滴度(SRBC),降低H/L比值。34。这些结果可能与这种特殊植物化学物质所描述的许多生物活性特性有关,如免疫刺激剂、抗菌药物、抗真菌以及与神经递质受体的相互作用。35,36,37.

环境方面的挑战对正在接触到它们的鸟类有直接的影响,但也可能对后代产生跨代的影响。38,39。雌性向后代传递多种母体成分,如激素、免疫甚至饮食成分(如类胡萝卜素或百里香酚)。根据环境匹配假说,这些成分将使未来的后代在类似的环境中发育。1,2,32,40,41,42,43,44。在鸟类物种中,雌性将所有的母体成分储存在卵子中,收集日常挑战所产生的所有生理信息。1。对卵子免疫特性的影响似乎与传递的母体成分有关。例如,添加类胡萝卜素的灰鹦鹉增加了鸡蛋蛋白中溶菌酶(一种抗菌酶)的浓度。40。在另一种情况下,蛋鸡受到脂多糖的免疫攻击。沙门氏菌提高鸡蛋蛋白的抗菌活性金黄色葡萄球菌45。最后,据报道,卵子中的激素,如睾酮,会影响蛋白中的免疫球蛋白浓度。43.

在上述复杂的情况下,本研究探讨了添加百里香酚是否能积极调节成年日本鹌鹑在面临环境挑战时的免疫应答。此外,它还评估了亲代经历的情况是否会影响其卵和后代的免疫代表变量。具体来说,我们评估了接种灭活疫苗的效果。沙门氏菌悬浮液和CHS暴露对成年日本鹌鹑PHA-P的炎症反应、抗SRBC抗体的产生和H/L比值的影响。在此基础上,对未受干扰的幼龄个体进行了相同的免疫相关变量的测定,并测定了卵的抗菌活性和凝集活性。

结果

亲代

对SRBC的效价分析表明,对SRBC没有任何处理效果,也没有相互作用。性别的主要影响(F=13.35,P<0.01)。1(A)检测到女性的滴度高于男性。

图1

性别对绵羊红细胞抗体效价的影响a),性与灭活沙门氏菌肠杆菌接种对异嗜细胞/淋巴细胞比率的影响b)、百里香酚膳食补充剂和环境挑战对PHA-P(PHA-P)炎症率的影响(c)和异嗜细胞/淋巴细胞比率(d)在83对成年日本鹌鹑中。膳食补充从103天开始,一直持续到研究结束(130天)。鹌鹑每天获得相当于80毫克/只鹌鹑的百里香酚剂量。在115日龄时,用肌肉注射法将鹌鹑接种肠道沙门氏菌(沙门氏菌)。在连续9天(121~129天)内,慢性热应激可使室温从24℃提高到34°C。考虑到没有检测到接种SE的主要效果,将SE动物和非SE动物集合在一起(c)和(d)。条形图代表平均值,线条表示标准误差。A,B不同字母组间差异有统计学意义(P<0.05)。

抗PHA-P的炎症反应(图1)。1(C)分析表明,日粮补充剂对CHS的影响主要是相互作用的(F=4.73;P=0.03)。后专案分析显示,受CHS方案影响的鹌鹑对PHA-P有较低的炎症反应。有趣的是,补充CHS方案和接触CHS方案的鹌鹑比未补充的鹌鹑有更高的炎症反应。

H/L比值分析表明,日粮添加量与CHS之间存在主要交互作用(F=5.14;P=0.02,图1)。1d)。后专案分析表明,在不添加百里香酚并暴露于CHS的鹌鹑组中,H/L比值最高。添加百里香酚并暴露于CHS方案的鸟类,其值与非应激鸟类相似。性别和接种量之间也存在交互作用(F=3.86;P=0.05),如图所示。1b)。雄性接种沙门氏菌肠杆菌的H/L比值高于未接种者。无论接种与否,雌性的H/L比值最高。

CHS方案第5、6、7、8、9天采集的卵数与采样日比较,差异无显着性(F<2.04,P-值>0.15)。

用于抗菌活性(图1.2(A)膳食补充剂与CHS之间存在主要交互作用(F=9.92;P=0.003)。后专案分析表明,不补充CHS但暴露于CHS的雌性卵比其他3组的卵具有更高的抗菌活性。

图2
figure2

百里香酚日粮添加量及环境挑战对抑菌活性的影响a)和凝集活性(b)在鹌鹑蛋里。膳食补充从103天开始,一直持续到研究结束(130天)。鹌鹑每天获得相当于80毫克/只鹌鹑的百里香酚剂量。在115日龄时,用肌肉注射法将鹌鹑接种肠道沙门氏菌。在连续9天(121~129天)内,慢性热应激可使室温从24℃提高到34°C。对慢性热应激第9天采集的40个卵(每处理5个)进行了分析。条形图代表平均值,线条表示标准误差。A-B/a-b不同字母组间差异有统计学意义(P<0.05)。

免疫原性沙门氏菌(无花果)2(B)分析表明,添加日粮(F=6.59;P=0.001)和应激处理(F=9.17;P=0.004)的主要效果,两者之间没有交互作用。添加百里香酚的雌性产卵显示出较高的抗虫效价。沙门氏菌比他们没有补充的对手。经CHS处理的雌性卵,其凝集效价高于在热饲养条件下饲养的雌性卵。

子代

各亲本组的雏鸡数量相似(F<1.17,P-值>0.28),平均每对亲本雏鸡2.52±1.23只。对未受干扰雏鸡抗PHA-P的炎症反应和SRBC滴度的分析表明,添加百里香酚对母鸡没有影响,对接种和(或)CHS挑战也没有交互作用。然而,与其他治疗方法相比,暴露于CHS的父母对雏鸡的炎症反应起主要作用(F=5.97;P=0.01;图1)。3(A)抗SRBC效价(F=11.26;P=0.01;图1)。3b)。父母接触CHS的雏鸡比未接触CHS的雏鸡表现出更高的炎症反应和较低的滴度。

图3
figure3

百里香酚日粮添加量及亲代环境挑战对PHA-P炎症率的影响(英文)a),反对SRBC(b)和异嗜细胞/淋巴细胞比率(c)不受干扰的后代。每组雏鸡数从15只到25只不等。条形图代表平均值,线条表示标准误差。在父母世代:膳食补充剂从103天开始,一直持续到研究结束(130天)。鹌鹑每天获得相当于80毫克/只鹌鹑的百里香酚剂量。在115日龄时,用肌肉注射法将鹌鹑接种肠道沙门氏菌(沙门氏菌)。在连续9天(121~129天)内,慢性热应激可使室温从24℃提高到34°C。考虑到未检测到接种SE的主要效果,将SE动物和非SE动物混合在一起。A-B/a-b各组间差异有统计学意义(P<0.05)。

H/L比值(图1)。3(C)统计分析显示,日粮补充剂的主要效应(F=65.00;P<0.001),与其他因素无交互作用。亲本添加百里香酚的雏鸡,其H/L比值低于未添加百里香酚的雏鸡。

讨论

本研究旨在评估补饲百里香酚是否能正向调节成年鹌鹑在同时受到环境挑战(CHS暴露及灭活接种)时的免疫反应。沙门氏菌(Enteritidis)此外,还对经历过的情况对其卵和后代的免疫代表变量的代际效应进行了评估。

先前曾描述过每一种环境挑战都会影响鸟类的生理,对鸟类的生长、发育、新陈代谢和行为产生重大影响。14,16,17,18,29,30,31,32。考虑到沙门氏菌接种疫苗作为一种免疫挑战,高温作为一种慢性应激源,报告了对鸟类生理的负面影响,特别是在禽类中,例如减少了摄食量,从而影响了体重的增加和饲料的转换。12,14,18,19。对于百里香酚来说,当这种天然化合物被纳入家禽的饮食中时,已经有了有益的效果,不仅改善了体重增加和脂肪酸稳定性等性能变量,而且在不影响运动活动的情况下也减少了与恐惧有关的反应。27,28,29,30。在我们的研究中,对亲代免疫变量的评估显示了SRBC和H/L比值的性别差异。女性对抗原的反应更强、更有活力,尽管接种量高于男性,但H/L比值仍高于男性。但是,和雌性不同的是,当雄性被接种时S.肠杆菌的H/L比值高于未接种的雄性。我们的结果,加上之前报道的性别差异6,7,表明男性更容易受到潜在有害环境病原体或抗原的影响,这表现在H/L比值升高,表明应激反应介质浓度增加(指标值越高,血浆介质浓度越高。46,47)。我们的结果与以前的报道一致,即暴露于CHS会削弱成年日本鹌鹑抗PHA-P的炎症反应和H/L比值。11,24,33。关于在热整(对照)条件下补充,以往的报告显示,当家禽种添加百里香酚或百里香酚及其异构体卡伐罗尔时,炎症和体液反应增强。34,35。然而,我们发现补充和不补充的对照成人之间没有免疫差异.值得一提的是,对PHA-P的炎症反应是一种可靠的鸟类促炎潜能的指标。48H/L比值是循环应力介质的经典指标。这一事实意味着,在控制条件下评估的免疫反应没有被百里香酚饮食补充改变,既不是积极的,也不是消极的。

然而,当鸟类暴露在高温环境下(chs组)时,我们观察到了先前报道过的麝香草酚免疫调节和免疫刺激效应。34,35。补加麝香草酚对父母的炎症反应有一定的改善作用,可防止H/L比值的增加。因此,百里香酚的补充似乎是有益的,当鸟类暴露在热应激条件下,防止炎症反应的抑制,从而部分保持中和和消除潜在有害微生物的能力。2,35。在这方面,人们已经证明,在鸟类中,热应激和添加植物源化合物都可能影响依赖于活性氧的细胞信号通路和转录因子。49,50,51。当热应激水平(急性或慢性、慢性循环或慢性恒定)和补充(剂量和补充方案的持续时间)联合应用时,可分别增加和降低肝脏转录因子NF-κB和Nrf 2的表达。正如在添加百里香酚和暴露于热应激的动物中观察到的那样,调节这些因子的表达可能导致抑制炎症反应(但不一定影响炎症信号)。因此,更好地理解不同程度的热应激和补充对细胞信号的影响是值得注意的,因为当这两种因素一起应用时,其影响和机制似乎与每个因素分别赋予的影响不同。49,52,53。关于H/L比值,先前的研究表明,麝香草酚也可以通过与GABA受体相互作用而影响中枢神经系统。36,54,55。在较高的环境温度下,这些机制可以得到加强,以帮助鸟类降低焦虑程度,并更好地应对这一挑战。因此,虽然这项研究没有证明这一点,但结果与压力介质的血浆浓度没有变化是一致的,这可以解释为什么白细胞数量的分布没有改变。

一般而言,与INE相互作用的激活相关的生理反应总是需要能量和资源,以应付压力源的影响,并在此之后重建基线条件。在潜在压力源的暴露下,无论其本质是什么,INE相互作用的激活都会引发一系列生理和行为变化,以应对其影响。9,56。因此,有机体必须有差异地分配资源,包括新陈代谢和能量,在某些情况下优先考虑生存,而在另一些情况下,则是繁殖,以证明某种权衡。9,57,58。在我们的研究中,沙门氏菌影响男性的H/L比值,使那些暴露于免疫挑战中的男性比不暴露于免疫挑战的男性更高。然而,同时暴露于免疫挑战和CHS协议并没有进一步影响属于父母一代的成年人的免疫反应。尽管成年人,特别是那些暴露在高环境条件下的成年人免疫应答受损,但环境因素对产卵没有正面或负面影响,因为在CHS协议的最后5天和结束后一天收集的卵子数量没有显著差异。根据我们的结果,父辈似乎会优先考虑下一代的能源和资源,即使这意味着损害了他们目前的反应潜力。

如前所述,鸡蛋不仅收集胚胎发育所必需的成分,而且还从母体饮食中收集抗菌蛋白、免疫球蛋白,甚至成分。40,59。在我们的研究中,在热流条件下繁殖的亲代产卵具有相似的抗菌活性,无论是否补充。亲本代添加百里香酚后,卵的凝集活性明显提高,与亲本是否处于CHS状态无关。抗菌活性是免疫系统固有分支的一部分,它提供对潜在病原体的非特异性保护。45。另一方面,所分析的凝集活性是免疫系统的获得性分支的一部分,在这项工作中,通过产生针对特定抗体的抗体来进行评估。沙门氏菌60。结果表明,向亲代补饲百里香酚,最好能改善对其的特异性体液免疫反应。沙门氏菌不影响/调节抗菌活性的非特异性反应,对鸡蛋中其他潜在有害病原体的一般反应。

不添加百里香酚的抗菌活性和凝集活性与添加百里香酚无关,均因亲代接触CHS方案而增加。重要的是要考虑到高温暴露会损害亲代的免疫反应(降低他们的炎症反应和增加H/L比值)。因此,我们的结果与先前的报告一致,即当繁殖活跃的成虫处于具有挑战性的环境条件时,他们会将能量和资源用于保护后代,而不是进行最佳的免疫应答。61,62,63。而当亲代补饲时,百里香酚对PHA-P的炎症反应有明显的调节作用,抑制了H/L比值的增加。在非应激母亲的卵子中也观察到了类似的结果。因此,百里香酚的补充有助于亲代更好地应对热应激的挑战条件,因此,“跨代努力”可以完全用于增强对特定病原体的后天免疫应答。

在鸟类物种中,所有的母体成分都是通过卵子从母鸡转移到幼鸟身上的。2。特别是,免疫成分可持续到2至3周,可提供保护,使其免受父母世代所面临的潜在威胁。64。在这段时间内,Rubolini等人。(2005)表明,鸡蛋中皮质酮浓度的升高抑制了抗PHA的炎症反应,但对抗新城疫的体液反应没有影响。65。小鸡从这些母性成分中获得独立,因为它们能够增强自己的免疫反应。在我们的研究中,在32日龄时,一旦后代在免疫上完全独立,父母连续9天暴露在高温下的雏鸡表现出抗PHA-P的炎症反应增加,抗SRBC抗体的产生降低。这些发现与母鸡一代的“编程”是一致的,他们用天生的免疫反应,而不是后天的免疫反应,开发出一种快速和不特定的反应,这将减少对付潜在病原体所需的精力和资源。2.

如预期一样,雏鸡的H/L比值保持在基础水平。24因为他们没有受到任何环境挑战。然而,虽然没有故意强调,但在其整个发展过程中,预计会出现一些压力反应。例如,在日常维护工作(如日常人工补充饲料、清理笔箱等)、捕捉、装箱、运输和处理孵化、腿和翅膀带以及住房期间,以及在安置为新群体(如孵化篮和幼鸟)并随之修改社会结构的过程中,预计会出现非特定的系统应激反应。7,65,66,67。有趣的是,亲本添加百里香酚的雏鸡比不添加百里香酚的雏鸡的H/L值低。这种降低的H/L比值(与低浓度的应激反应介质相一致)表明,添加百里香酚的父母饮食可能会对他们的后代产生影响,可能有助于他们更好地处理发育过程中不可避免的压力源。根据观察到的结果,出现了一些问题:这些小鸡是否能够更好地处理未来其他具有挑战性的环境?此外,如果后代暴露在与亲代鸟类相同的环境条件下,幼鸟是否会表现出跨代效应,使它们能够更好地应对这些同样的挑战?这些问题的答案可以在环境匹配/失配假说中找到。考虑到代际或母代效应是向后代发出信号和规划程序,使其在类似的环境中开展日常活动,在这种环境中,成年一代被培养出来,因此,出生前和出生后环境之间的潜在相似和差异可能正在影响后代。38,68。此前在这一领域的研究发现,在CORT水平的增加和不同的食物获取途径方面,环境失调是在养育后代的环境和养育后代的环境对后代的生长、生理和发育产生影响的环境之间存在的。38,68。然而,考虑到我们在研究中使用的环境因素,还需要进一步的试验来探索和更好地理解研究中的现象及其潜在的影响。

总之,环境条件可以调节亲代的免疫反应,也可能对后代产生跨代影响。日粮中添加百里酚可部分和正地调节PHA-P的炎症反应,避免了高温环境下亲代H/L比值的改变,说明这些成虫能更好地应对这一挑战。成人对应激源的处理能力较好,这一事实影响了卵的抗菌活性,显示出与受热条件下雌性产卵相似的价值。无论繁殖条件如何,百里香酚都能提高其凝集活性。沙门氏菌因此对特定的病原体给予保护。添加百里香酚的成虫对后代也有跨代效应,H/L比值较低。这表明,雏鸡更有能力处理与传统繁殖条件相关的潜在压力情况。

材料和方法

畜牧

成体(亲代)和幼龄(后代)日本鹌鹑(乌图尼克斯)由于体型小、生命周期短、维护成本低,被用作鸟类动物模型。69。鹌鹑按照标准实验室规程饲养。44,70。动物护理是按照动物保护和使用委员会的指导方针提供的。实验程序得到了生物调查研究所(IIByT)道德委员会的批准,该委员会遵守了关于为实验和其他科学目的使用动物的立法(2016年11月17日第27号行动)。

亲代

共有83对雌性:100日龄的日本雄性鹌鹑被安置在45×20×25厘米(长×宽×高)的密闭笼子里,50%的地板被瓦楞纸板和一个塑料球覆盖。7,71。在那个年龄,所有的雌性都在产卵和采摘卵子(每周产5到7个蛋)。在整个实验过程中,我们提供了食物和水。在整个研究过程中,鸟类每天被维持14小时的光照周期(300-320 lx)和10小时的黑暗,在早上06:00打开灯。室温保持在25℃(舒适度)。为了适应饲养笼,在实验操作开始前3天(100~102 DA),鸟类被安置在实验设施中。

3×2析因实验设计(图1)。4)以日粮补充(不添加与补充)、未接种与接种)和CHS(非应激与应激)作为影响因素。在此基础上,建立了8个试验组。

图4

时间表计划。饮食补充从103天开始,一直持续到采血后(130天)。鹌鹑每天获得相当于80毫克/只鹌鹑的百里香酚剂量。在115日龄时,用肌肉注射法将鹌鹑接种肠道沙门氏菌。连续9天(119~127天)采用热应激方案,白天将室温从24℃提高到34°C。

饮食补充是在Nazar等人之后提供的。(2018)议定书24。简单地说,百里香酚是从Sigma-Aldrich(safc,≥99%;fcc,圣路易斯,MO,美国)获得的.添加鹌鹑日粮时,每公斤饲料提供2克百里香酚(相当于每只鸟80毫克百里香酚/天的≈)。在2.4%w/v乙醇溶液中制备百里香酚,并在新鲜饲料上均匀喷施。31。按饲料处理标准,每3天按≈40g/鹌鹑比例提供饲料。补药开始于103日龄(接种前13天和chs方案开始前18天),以达到生理平台或有机体中麝香草酚的静止状态,并确保百里香酚向effyolk转移。44,72)。补充工作一直持续到取得血样为止(130天,见下文)。

接种量为115天,即采血前15天。300升福尔马林悬浮液灭活沙门氏菌爵士。Enteritidis(108根据先前的治疗分配,将细菌/鹌鹑肌肉注射到男性和女性右侧乳房中。60。没有接种疫苗的成年人沙门氏菌Enteritidis作为他们的对手被处理,但没有暴露于免疫挑战。

CHS协议是按照Nazar等人的要求执行的。(2018年)24。从8:30 h开始,室温从25℃提高到34°C,维持在34°C到16:30 h,16:30 h温度逐渐降低,大约19:30 h恢复到24°C,9天(121~129天)建立了CHS方案。

子代

在CHS协议第5、第6、第7、第8和第9天(125至129天)和第130岁(同时采集血样)收集亲代的卵子;因此取样包括连续6天。假设在最后一天采集的卵子也收集了雌性在前一天(CHS协议第9天)所经历的所有信息。所有的卵子都被正确的标记,以确定与8种处理相关的后代。各处理的产卵量无显着性差异(广义线性模型,泊松分布,F<2.04,P-值>0.15)。以CHS方案第9天采集的5枚蛋(5×8=40枚)为研究对象,分析各处理对卵子免疫指标的影响(见下文)。其他卵子按照标准实验室程序人工孵化。73。上午10点。孵化日,雏鸡被绑上腿,以追踪其父母的处理情况。将鹌鹑随机安置在三个90×90×60 cm(长×宽×高)的混合亲本饲养笔盒中。每个盒子有一个90厘米的喂食器和16个自动饮用奶嘴的人。一个铁丝网地板(1厘米网格)被抬高了5厘米,以允许排泄物和盖子防止鸟类逃逸。第一周孵化温度为37℃,每周下降3℃至25℃。在出生前4周,提供鹌鹑起动机饲料(24%CP;2900千卡ME/kg)和水。在整个研究过程中,鹌鹑每天受到14小时的光照(300~320 LX)和10小时的黑暗。值得一提的是,幼雏是不受干扰地抚养长大的,没有受到父母这一代人所面临的任何环境挑战。共对21只未加/不接种/非应激、17只未添加/接种/不受胁迫、15只补充/不接种/不胁迫、21只补充/接种/非胁迫、25只未补充/接种/接种/应激、18只未补充/接种/接种/应激、22只补充/非接种/应激、20只补充/接种/应激鸡进行了评估。各处理的雏鸡数量无显着性差异(广义线性模型,泊松分布,F<1.17,P-值>0.28,平均雏鸡数为2.52±1.23)。

血液取样

血样用1ml无菌注射器,用乙二胺四乙酸(EDTA)处理,采集每只鹌鹑颈静脉的血液。一滴血滴用于涂片准备,其余的在2000年离心。g在15分钟内,以获得血浆为以后测定对SRBC以前诱导的滴度(见下文)。在成年人中,在130天(CHS协议结束后的第二天)进行血液取样,而在后代中,在32天时进行血液取样。

在父母和他们的后代中,免疫变量都被评估。

抗PHA-P(Sigma化学,St Louis,MO,USA;pH:7.1)的炎症反应按Nazar等人的描述进行了评估。(2018年)24。在采血前24h,用数字卡尺测量右翅网,然后在磷酸盐缓冲液中注入1mg/mlPHA-P溶液0.05 ml。24小时后,在采血后即刻,再次测量相应的翅膀网,以确定炎症所致的百分比。

用圆底微凝集法测定SRBC(Hemo-G;Rafaela,Santa Fe,阿根廷)的滴度。在采血前一周,腹腔注射10%SRBC溶液300μg/L。用Nazar等人的方法进行微凝集试验。(2018年)24.

先前准备的血液涂片用5-GrundwalGiemsa染色。在400×放大的白光光学显微镜下,对淋巴细胞、异嗜细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱细胞和单核细胞等白细胞(共100个细胞)进行计数。然后计算出每只鹌鹑的H/L比值。

卵子中的免疫变量

用Shawkey等人描述的方法测定抗菌活性。(2008年),略作修改74。阿大肠杆菌菌株在37°C 160 rpm下,在含有50 ml蒸馏水、0.5 g三角内酯、0.25 g酵母膏和0.5 g NaCl的无菌培养基中过夜。然后,用该菌剂在600 nm处制备最终吸光度为0.7的溶液。用该溶液对96口平底井板进行了测定.简单地说,在每口井中,细菌溶液的80升与每处理5个鸡蛋中的20粒白卵混合(共40个卵)。该平板在37°C下孵育一夜,然后用Multiskan谱v1.2微板阅读器测量了600 nm处的光密度。将其抗菌活性与空白(生理性溶液80μl、白卵20μl)和阴性对照(80μl加悬浮液、20l生理性溶液)进行比较。重要的是要考虑到变量值越低,细菌生长的抑制程度就越高。45.

测定免疫原性沙门氏菌蛋黄用蒸馏水匀浆1:5。在此基础上,用U底96孔板进行微效价平板凝集法测定其对微生物的效价.简单地说,将蛋黄样品的50倍系列稀释液与50%.沙门氏菌肠易激灭活抗原(马卡 108细胞/ml)。用37°C孵育18 h,以凝集效价作为蛋黄的最高稀释度,观察到明显的凝集作用。

统计分析

所有变量均采用广义线性混合模型进行分析,在添加饲料的情况下,接种量和CHS均为固定效应。对亲代和卵子评价变量的分析还包括笼的同一性作为随机效应,子代变量的分析也包括作为随机效应的笔盒同一性。由于男性和女性之间的预期差异,性别也被作为一种固定的效应纳入了父母的一代。根据数据的分布对每个变量进行分析。P值<0.05者有显着性差异(P<0.05)。采用LSD Fisher检验进行后比较。所有统计分析都是在InfoStat中实现的“R”(R统计计算基金会)用户友好界面下进行的。64.


武汉新启迪生物科技有限公司联系邮箱:
service@qidibio.com  techsupport@qidibio.com  
武汉新启迪生物科技有限公司咨询客服:周一至周五8:30-17:30
联系我们
服务保障                        支付方式
武汉新启迪生物科技有限公司联系电话:
027-87610298
027-87610297