您好,请问有什么可以帮到您的。 点击这里给我发消息
武汉新启迪生物科技有限公司
新启迪-您的生物科研好伙伴!
本企业通过iso9001质量体系认证

SOUTHERN印迹

 二维码
发表时间:2020-07-29 16:53作者:武汉新启迪生物Xinqidibio来源:www.qidibio.com

SOUTHERN印迹


1.正常运行凝胶。通常对于南方人基因组学,希望在4-6小时内进行长凝胶(18厘米)电泳。

2.用与分子量标记相邻的标尺拍照以作为参考。

3.碱转移缓冲液= 0.5M NaOH(20g / lt),1.5M NaCl(87.66 g / lt)。准备1升用于一种凝胶,再准备750毫升用于其他凝胶。注意该缓冲液非常危险,会造成严重的眼睛伤害。小心使用此过程中涉及的大量物品,并戴好防护眼镜。

4.将凝胶添加到250ml碱转移缓冲液中,每增加一个凝胶添加125ml。

5.将凝胶放在装有缓冲液的摇杆上20分钟。注意必须缓慢搅动低琼脂糖凝胶以防止撕裂。

6.将剩余的500毫升留在转移罐中。

请按以下步骤戴手套

7.切成两块大的3MM纸(灯芯),并切成两块,每块边缘上的胶要比凝胶小2mm,再切一块与胶大小相同的尼龙(Hybond N +,Amersham)。

大胶体(HFI)中胶体迷你胶体

2(14 x 19厘米)2(15.2 x 10)2(9 x 5.2)

2(14 x 32厘米)2(15.2 x 32)2(18.5 x 5.2)

切一叠纸巾,其厚度比凝胶小约2mm。堆栈需要大约6厘米厚。

8.将尼龙预先浸入DDW中,然后浸入碱转移缓冲液中。

9.添加缓冲液以将储罐移至平台高度。将长芯吸湿,放在传输缓冲区中,并放入水箱中。

10.将凝胶放在平台上,然后将勺子放在转移缓冲液上。添加尼龙,并用手指的背部抚平气泡。

11.添加2个稍小的3MM过滤器,第一个预湿,第二个干燥。

12.添加一叠纸巾。注意,非常重要的一点是,毛巾的边缘不要碰到凝胶所坐的灯芯,否则转印会“短路”。

13.用玻璃或塑料板和重物(最理想的是装有200-300ml H2O的瓶子)放在堆栈顶部。太大的重量会压缩凝胶并尽早终止转移。

14.允许转移o / n,然后小心地取出纸叠。卸下过滤器之前,请用biro标记过滤器上的孔位置(并注意#1孔的位置)。将滤膜浸入0.5M Tris pH 7.5、1.5M NaCl中5分钟。从凝胶中取出后。

15.将过滤器添加到200ml 2 X SSC中,并在不搅拌的情况下浸泡5分钟。

16.取下过滤器,吸干并在80摄氏度下烘烤?在不工作但很热的情况下,放置2小时或在高压釜中放置10分钟。

17.用10毫升Aqua进行预杂交。 b (试剂),1%SDS和100ug / ml将鲱鱼精子DNA煮沸20-30分钟(南部克隆DNA)至数小时(南部基因组)。

18.煮沸3'探针,并加入3ml新鲜的hyb溶液/ SDS / Herring DNA。从袋子中挤出前浆,然后添加探针。密封,避免气泡并均匀分布探头。孵育4-6hr +(克隆的DNA)至16-20hr(南部基因组)。根据探针与靶标的同源性,在2至0.2X SSC,0.1%SDS中进行洗涤。


文章分类: 分子技术资料
分享到:
武汉新启迪生物科技有限公司联系邮箱:
service@qidibio.com  techsupport@qidibio.com  
武汉新启迪生物科技有限公司咨询客服:周一至周五8:30-17:30
联系我们
服务保障                        支付方式
武汉新启迪生物科技有限公司联系电话:
027-87610298
027-87610297